应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】引物设计问题求助！
51/1返回列表
查看: 1533  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

hnndpt

铁虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】引物设计问题求助！ 已有3人参与

我在NCBI上找到了一个基因的mRNA序列，有完整的阅读框。但是从序列的第5个碱基开始就是编码区，我想从第一个碱基开始设计引物，但是一个老师说测序时前几十个碱基都是不可信的，建议设计的引物离阅读框稍微远一点，但是阅读框离现有序列的5‘端太近，请问这引物该怎么设计？
问题2：
     我想用现有的这个mRNA序列在本物种的EST库中寻找这个基因的EST序列，然后拼接，想把5’端的序列延长一点，但是当我对比之后发现有很多的EST序列，我该选用哪些序列进行拼接？附图中这几个参数都表示什么意思？MAX Score,total score;query coverage;E value.  N.      今天听一个同学说比较EST的时候主要看E值，E值多少才算有重叠呢？图片如下：
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-08-04 18:15:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

大白菜123789

铜虫 (小有名气)
★
reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-08-05 05:57:53
hnndpt(金币+1):非常感谢！ 2010-08-05 09:14:26
可以从中间片段设计引物，进行5‘RACE，就可以拿到5'序列了，然后就可以在此设计引物了
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2010-08-04 20:56:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
看天(金币+1):鼓励交流 2010-08-04 18:43:52
hnndpt(金币+1):非常感谢！ 2010-08-05 09:14:12
测序前几个碱基不准确，很好解决，双向测通就可以了
但是我现在担心的是，你从一开始设计的引物不一定好用，你可以试试
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-08-04 18:32:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xp198766

铁杆木虫 (著名写手)

小木虫职业打酱油滴~~！
★ ★
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-08-05 05:57:46
hnndpt(金币+1):非常感谢！ 2010-08-05 09:14:21
你设计多长目标的引物啊？可以克隆测序不就可以得到全长了？
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-08-04 18:38:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nmhsd

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
克隆测序是可以测到PCR引物的。
赞一下 回复此楼
5楼2012-07-14 22:28:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:34 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 22:11 by XQNyDCa1Tk5n
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[有机交流] OpenAI又攻克数学难题了，离AI做有机合成还有多远？ +3 wangyl_123 2026-10-10 6/300 2026-10-11 15:04 by Abin0406
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[教师之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:45 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[考博] 招收博士生一名 +3 mandolin 2026-10-10 3/150 2026-10-11 10:21 by 不是山谷！
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么？ +3 好运来～9527 2026-10-10 5/250 2026-10-11 09:00 by 好运来～9527
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 4/200 2026-10-11 03:14 by M0zrYVSAnxpE
[有机交流] 各位大佬，路线设计求助 +6 zapen 2026-10-08 8/400 2026-10-10 15:59 by zapen
[基金申请] 入职后第一次管课题组的专利缴费，对账才发现官费比别人多掏了一倍 +5 13108017953 2026-10-08 5/250 2026-10-10 11:15 by wdwd123
[有机交流] 我应该选哪条合成路线让实验成功率高一些？ +5 jing816y 2026-10-08 9/450 2026-10-10 09:05 by zapen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭