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王雨云

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于电转酵母X33的问题 已有7人参与

我的表达载体是用的PPICZa,现在电转酵母X33感受态细胞,电压2000v,通电时间3~5ms,但是电转了很多次都得不到阳性转化子。电转的结果要么是不长菌,要么是正常时间里(隔一天长菌)长菌,但是菌落PCR检测全为阴性,不知道还有什么因素会影响电转效率??(基本可以确定我的感受态效果较好,线性化的产物浓度也很大,每80ul感受态加入10ul线性化产物)
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王雨云

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 旋木晴晴 at 2010-07-07 17:20:10:



酵母菌落PCR相对细菌比较难一点,楼主P不出也可能是PCR本身的问题。其实已经转成功了。建议菌落PCR时用LITCASE(没有可以用溶菌酶替代)37°处理一小时再反复冻容作为模板。我感觉只要长出来90%都时阳性克 ...

也听说过这样的方法,而且以前实验室的一师姐还像你说的那样提过酵母总DNA,总是提不出来,不过鉴于目前我的状况还是可以试一下的
9楼2010-07-09 08:13:46
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silicare

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王雨云(金币+1):谢谢参与
王雨云(金币+1): 2010-07-07 07:43:31
貌似你以前咨询过这个问题吧
2楼2010-07-06 18:20:38
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zemin_fang

木虫 (正式写手)


王雨云(金币+1):谢谢参与
王雨云(金币+1): 2010-07-07 07:43:37
你用什么buffer重悬酵母的?是不是电阻太小,导致电流过大?
3楼2010-07-06 19:46:23
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旋木晴晴

金虫 (小有名气)

妞妞



王雨云(金币+1):谢谢参与
楼主怎么确定你的感受态没问题?建议电转后加山梨醇30°保温时间适当延长。
4楼2010-07-06 20:40:08
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