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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于大肠杆菌中蛋白表达的问题
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泡泡9706

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于大肠杆菌中蛋白表达的问题 已有8人参与

在大肠杆菌中表达了一个酶蛋白，该酶在原菌中是胞外酶，在载体上插入的是酶基因包括信号肽在内的全部序列，请问一下，有可能会在胞内或者周质空间产生切去信号肽的该酶吗？
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1楼 2010-06-13 14:06:37
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泡泡9706

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zemin_fang at 2010-06-15 08:13:23:
不知道楼主加入外源基因信号肽的目的是什么，一般表达用载体自身的信号肽不是可以吗？外源信号肽如果大肠杆菌不能识别蛋白会形成包涵体的。

引物是我上届师兄设计的，当时我刚接触，就接着做了。他把载体自带的信号肽切掉了，插入的是带有信号肽的全序列。现在表达出来了，产生包涵体，但我优化条件后也能产一部分可溶蛋白了。我想问这部分蛋白有没有可能切掉信号肽进入周质空间呢？
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9楼2010-06-17 17:02:45
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biogefart

木虫 (著名写手)
★
泡泡9706(金币+1):谢谢！那外源的信号肽大肠杆菌也有可能识别吗？ 2010-06-13 14:36:54
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-06-13 15:59:05
胞内不太可能吧，应该在周质里面
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闹太套
2楼2010-06-13 14:16:45
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
1949stone:把包涵体洗出来不就好了 大量表达 后来的复性也学有难度 如果是有活性的 乐开花了 2010-06-13 16:00:53
泡泡9706(金币+1): 2010-06-17 16:59:41
看运气，不形成包涵体你就万幸吧
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3楼2010-06-13 15:29:46
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liyong1981

金虫 (正式写手)
泡泡9706(金币+1): 2010-06-17 16:59:37
这个，真不好说，做了才知道，因为原核生物表达出的蛋白比真核的复杂，你都不知道它到底怎么折叠的，那3级结构，千奇百怪~
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4楼2010-06-13 16:46:59
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