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泡泡9706

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于大肠杆菌中蛋白表达的问题 已有8人参与

在大肠杆菌中表达了一个酶蛋白,该酶在原菌中是胞外酶,在载体上插入的是酶基因包括信号肽在内的全部序列,请问一下,有可能会在胞内或者周质空间产生切去信号肽的该酶吗?
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泡泡9706

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by zemin_fang at 2010-06-15 08:13:23:
不知道楼主加入外源基因信号肽的目的是什么,一般表达用载体自身的信号肽不是可以吗?外源信号肽如果大肠杆菌不能识别蛋白会形成包涵体的。

引物是我上届师兄设计的,当时我刚接触,就接着做了。他把载体自带的信号肽切掉了,插入的是带有信号肽的全序列。现在表达出来了,产生包涵体,但我优化条件后也能产一部分可溶蛋白了。我想问这部分蛋白有没有可能切掉信号肽进入周质空间呢?
9楼2010-06-17 17:02:45
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biogefart

木虫 (著名写手)


泡泡9706(金币+1):谢谢!那外源的信号肽大肠杆菌也有可能识别吗? 2010-06-13 14:36:54
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-06-13 15:59:05
胞内不太可能吧,应该在周质里面
闹太套
2楼2010-06-13 14:16:45
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silicare

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优秀版主

1949stone:把包涵体洗出来不就好了 大量表达 后来的复性也学有难度 如果是有活性的 乐开花了 2010-06-13 16:00:53
泡泡9706(金币+1): 2010-06-17 16:59:41
看运气,不形成包涵体你就万幸吧
3楼2010-06-13 15:29:46
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liyong1981

金虫 (正式写手)


泡泡9706(金币+1): 2010-06-17 16:59:37
这个,真不好说,做了才知道,因为原核生物表达出的蛋白比真核的复杂,你都不知道它到底怎么折叠的,那3级结构,千奇百怪~
4楼2010-06-13 16:46:59
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