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泡泡9706

银虫 (小有名气)

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[交流] 【求助/交流】关于大肠杆菌中蛋白表达的问题已有8人参与

在大肠杆菌中表达了一个酶蛋白，该酶在原菌中是胞外酶，在载体上插入的是酶基因包括信号肽在内的全部序列，请问一下，有可能会在胞内或者周质空间产生切去信号肽的该酶吗？

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1楼2010-06-13 14:06:37

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zemin_fang

木虫 (正式写手)

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★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):欢迎多多交流~~ 2010-06-17 21:24:17

引用回帖:

Originally posted by 泡泡9706 at 2010-06-17 17:02:45:

引物是我上届师兄设计的，当时我刚接触，就接着做了。他把载体自带的信号肽切掉了，插入的是带有信号肽的全序列。现在表达出来了，产生包涵体，但我优化条件后也能产一部分可溶蛋白了。我想问这部分蛋白有没有可 ...

带上基因自身的信号肽形成包涵体的几率非常大，而且大肠杆菌不一定能识别，蛋白进入周知空间也就不可能了。
如果要验证，可以用溶菌酶破解细胞壁然后收集上清SDS-PAGE电泳检测或测定酶活力。