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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于大肠杆菌中蛋白表达的问题
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泡泡9706

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于大肠杆菌中蛋白表达的问题 已有8人参与

在大肠杆菌中表达了一个酶蛋白，该酶在原菌中是胞外酶，在载体上插入的是酶基因包括信号肽在内的全部序列，请问一下，有可能会在胞内或者周质空间产生切去信号肽的该酶吗？
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1楼 2010-06-13 14:06:37
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zemin_fang

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):欢迎多多交流~~ 2010-06-17 21:24:17
引用回帖:
Originally posted by 泡泡9706 at 2010-06-17 17:02:45:

引物是我上届师兄设计的，当时我刚接触，就接着做了。他把载体自带的信号肽切掉了，插入的是带有信号肽的全序列。现在表达出来了，产生包涵体，但我优化条件后也能产一部分可溶蛋白了。我想问这部分蛋白有没有可 ...

带上基因自身的信号肽形成包涵体的几率非常大，而且大肠杆菌不一定能识别，蛋白进入周知空间也就不可能了。
如果要验证，可以用溶菌酶破解细胞壁然后收集上清SDS-PAGE电泳检测或测定酶活力。
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10楼2010-06-17 20:12:29
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biogefart

木虫 (著名写手)
★
泡泡9706(金币+1):谢谢！那外源的信号肽大肠杆菌也有可能识别吗？ 2010-06-13 14:36:54
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-06-13 15:59:05
胞内不太可能吧，应该在周质里面
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闹太套
2楼2010-06-13 14:16:45
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silicare

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1949stone:把包涵体洗出来不就好了 大量表达 后来的复性也学有难度 如果是有活性的 乐开花了 2010-06-13 16:00:53
泡泡9706(金币+1): 2010-06-17 16:59:41
看运气，不形成包涵体你就万幸吧
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3楼2010-06-13 15:29:46
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liyong1981

金虫 (正式写手)
泡泡9706(金币+1): 2010-06-17 16:59:37
这个，真不好说，做了才知道，因为原核生物表达出的蛋白比真核的复杂，你都不知道它到底怎么折叠的，那3级结构，千奇百怪~
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4楼2010-06-13 16:46:59
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