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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】怎么就是p不出目的片段啊
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wangxueqin

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】怎么就是p不出目的片段啊已有14人参与

向高手请教：
目前在扩一个片段，已经有人用这对引物扩过，都得到的是800bp的片段，我第一次扩的时候直接用56的退火温度（查文献说这个片段GC含量较高，需较高退火温度，引物不是我们自己设计的，是前人文章中得来的），结果很好，整齐且亮的主带，没有任何杂带，虽然大小不对， 我还是将结果送去测序，可是结果回来根本不是我们要扩的片段中的，连一部分也不是。昨天我又用48的退火温度做了个，可是依旧是只有200bp附近有主带，在800bp附件连杂带也是非常弱的啊。
请问下高手有何方法，可以把800bp的带给扩出来啊，因为前人做过实验证实是可以扩出来的。多谢多谢。
有图
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1楼2010-05-26 09:42:03
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liyong1981

金虫 (正式写手)
★
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前人，我想问，现在的学生做的实验，有几个是可信的？你要确定可信，或者把他找过来再做一次
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2楼2010-05-26 09:44:09
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老夏853

铁杆木虫 (著名写手)
★
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楼上真强悍 不是不真实 而是在发文章的时候吧稍微有一点含金量的东西都会做一些变动 毕竟也是人 辛苦摸索的条件可以理解 但是 这可是中国学术进步的 一大障碍 ~~
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3楼2010-05-26 09:49:20
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最爱花诗雨

金虫 (正式写手)

穷鬼
★
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不好找原因，只能无根据的猜测，如果以前真的做出来，那么按照原来的条件一模一样再做一遍好了，确保操作和试剂都是正确的。
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严于律己，宽以待人
4楼2010-05-26 09:53:33
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dongya

木虫 (正式写手)
★
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我也觉得只有重复试试了！
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走自己的路！穿自己的鞋！~~
5楼2010-05-26 10:02:43
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cqyniu

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你说的前人是你们实验室的师兄师姐还是你看了别的实验室的文章做的啊，文章有时候不可靠
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6楼2010-05-26 11:22:32
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xpb2005

银虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):同意~· 2010-05-29 09:42:35
跑梯度看看啊，别人用的条件自己做不一定就能重复出来。只要确保引物没问题，条件你可以自己试啊，做出来就可以。
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7楼2010-05-26 12:19:11
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欣如止水

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
估计是用了特殊的PCR方法吧，继续摸索条件吧
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8楼2010-05-26 13:34:21
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amilie030312

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):感谢交流~~ 2010-05-29 09:42:55
跑梯度试试看哪个温度更好，温度越高杂带越少，温度越低越容易出条带。找到800的条带最清晰的温度。但是你这个杂带这么多，就说明这对引物不咋的。
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9楼2010-05-26 13:50:47
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wangxueqin

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by dongya at 2010-05-26 10:02:43:
我也觉得只有重复试试了！

我是在别人的博士论文上面查到的，他们可能结果做的也不好，所以序列都没有上传到NCBI上面去，所以我要自己做，结果竟然做不出来，太奇怪了，按说也不应该
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10楼2010-05-26 13:54:20
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