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wangxueqin

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】怎么就是p不出目的片段啊已有14人参与

向高手请教:
目前在扩一个片段,已经有人用这对引物扩过,都得到的是800bp的片段,我第一次扩的时候直接用56的退火温度(查文献说这个片段GC含量较高,需较高退火温度,引物不是我们自己设计的,是前人文章中得来的),结果很好,整齐且亮的主带,没有任何杂带,虽然大小不对, 我还是将结果送去测序,可是结果回来根本不是我们要扩的片段中的,连一部分也不是。昨天我又用48的退火温度做了个,可是依旧是只有200bp附近有主带,在800bp附件连杂带也是非常弱的啊。
请问下高手有何方法,可以把800bp的带给扩出来啊,因为前人做过实验证实是可以扩出来的。多谢多谢。
有图
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amilie030312

金虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):感谢交流~~ 2010-05-29 09:42:55
跑梯度试试看哪个温度更好,温度越高杂带越少,温度越低越容易出条带。找到800的条带最清晰的温度。但是你这个杂带这么多,就说明这对引物不咋的。
9楼2010-05-26 13:50:47
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liyong1981

金虫 (正式写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
前人,我想问,现在的学生做的实验,有几个是可信的?你要确定可信,或者把他找过来再做一次
2楼2010-05-26 09:44:09
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老夏853

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
楼上真强悍 不是不真实 而是在发文章的时候吧稍微有一点含金量的东西都会做一些变动 毕竟也是人 辛苦摸索的条件可以理解 但是 这可是中国学术进步的 一大障碍 ~~
3楼2010-05-26 09:49:20
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最爱花诗雨

金虫 (正式写手)

穷鬼


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
不好找原因,只能无根据的猜测,如果以前真的做出来,那么按照原来的条件一模一样再做一遍好了,确保操作和试剂都是正确的。
严于律己,宽以待人
4楼2010-05-26 09:53:33
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