应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】怎么就是p不出目的片段啊
171/2返回列表12下一页
查看: 1893  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

wangxueqin

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】怎么就是p不出目的片段啊 已有14人参与

向高手请教：
目前在扩一个片段，已经有人用这对引物扩过，都得到的是800bp的片段，我第一次扩的时候直接用56的退火温度（查文献说这个片段GC含量较高，需较高退火温度，引物不是我们自己设计的，是前人文章中得来的），结果很好，整齐且亮的主带，没有任何杂带，虽然大小不对， 我还是将结果送去测序，可是结果回来根本不是我们要扩的片段中的，连一部分也不是。昨天我又用48的退火温度做了个，可是依旧是只有200bp附近有主带，在800bp附件连杂带也是非常弱的啊。
请问下高手有何方法，可以把800bp的带给扩出来啊，因为前人做过实验证实是可以扩出来的。多谢多谢。
有图
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-05-26 09:42:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyong1981

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
前人，我想问，现在的学生做的实验，有几个是可信的？你要确定可信，或者把他找过来再做一次
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-05-26 09:44:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

老夏853

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
楼上真强悍 不是不真实 而是在发文章的时候吧稍微有一点含金量的东西都会做一些变动 毕竟也是人 辛苦摸索的条件可以理解 但是 这可是中国学术进步的 一大障碍 ~~
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-05-26 09:49:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

最爱花诗雨

金虫 (正式写手)

穷鬼
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
不好找原因，只能无根据的猜测，如果以前真的做出来，那么按照原来的条件一模一样再做一遍好了，确保操作和试剂都是正确的。
赞一下(1人) 回复此楼
严于律己，宽以待人
4楼2010-05-26 09:53:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dongya

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我也觉得只有重复试试了！
赞一下(1人) 回复此楼
走自己的路！穿自己的鞋！~~
5楼2010-05-26 10:02:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cqyniu

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你说的前人是你们实验室的师兄师姐还是你看了别的实验室的文章做的啊，文章有时候不可靠
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2010-05-26 11:22:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xpb2005

银虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):同意~· 2010-05-29 09:42:35
跑梯度看看啊，别人用的条件自己做不一定就能重复出来。只要确保引物没问题，条件你可以自己试啊，做出来就可以。
赞一下(2人) 回复此楼
7楼2010-05-26 12:19:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

欣如止水

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
估计是用了特殊的PCR方法吧，继续摸索条件吧
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2010-05-26 13:34:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amilie030312

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):感谢交流~~ 2010-05-29 09:42:55
跑梯度试试看哪个温度更好，温度越高杂带越少，温度越低越容易出条带。找到800的条带最清晰的温度。但是你这个杂带这么多，就说明这对引物不咋的。
赞一下(2人) 回复此楼
9楼2010-05-26 13:50:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangxueqin

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by dongya at 2010-05-26 10:02:43:
我也觉得只有重复试试了！

我是在别人的博士论文上面查到的，他们可能结果做的也不好，所以序列都没有上传到NCBI上面去，所以我要自己做，结果竟然做不出来，太奇怪了，按说也不应该
赞一下 回复此楼
10楼2010-05-26 13:54:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wangxueqin 的主题更新
171/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 小白求助 投论文要求的highlights应该如何写 5+3 l1963982152 2026-08-29 4/200 2026-09-01 09:04 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上） +7 gdd2018 2026-08-28 12/600 2026-09-01 08:32 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 国社科又开始会评了，不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-31 21:30 by xiangy672
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 能否申诉？ +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 为什么到现在没收到通知？ +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 我不理解！ +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭