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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】怎么就是p不出目的片段啊
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liyong1981

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
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scelab(金币+2):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-05-27 00:05:11
博士？你最好联系他一下，亲自问问他·
说过来，还是自己做，别人的只是参考，参考不行了，就抛弃吧，别拿着一博士论文当宝典，他不是分子克隆，你参考下老外做的文章，也许会更有参考些
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11楼2010-05-26 14:40:28
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陈思容

铜虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-05-27 00:05:19
那个退火温度也太低了吧，非特异性扩增，确保模板没问题，然后优化实验条件
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12楼2010-05-26 16:29:53
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haitian0625

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
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scelab(金币+3):鼓励新虫！欢迎多来交流！:tiger06: 2010-05-27 00:05:32
我认为应该自己再设计对引物，用Oligo6分析后，再和前人的引物Blast一下。看看哪个结果最好。
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13楼2010-05-26 21:18:57
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yidaqunyan

木虫 (正式写手)

博士
★
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建议你做降落PCR或者设计巢氏，你的理论退火温度是多少？48度的退火是不是太低了？退火温度低的话，会有很多非特异性扩增，我也出过这种现象
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不孝有三，读博为大！
14楼2010-05-27 11:44:19
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zj0726

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
还是自己设计下引物吧~这样比较保险
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15楼2010-05-27 17:09:00
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wangxueqin

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yidaqunyan at 2010-05-27 11:44:19:
建议你做降落PCR或者设计巢氏，你的理论退火温度是多少？48度的退火是不是太低了？退火温度低的话，会有很多非特异性扩增，我也出过这种现象

目前的问题是没有杂带啊，要是有杂带倒是可以提高下退火温度，昨天我又试了加DMSO和BSA，还是200的主带整齐清晰，没有任何杂带，我想可能是引物不对。因为我看了下，博士论文他们还没有发文章呢，而且有两个人扩过这个片段，结果都不太理想，我想他们可能还有人继续做吧，引物可能是误导的，我还是自己设计引物了。谢谢大家的帮助啦。
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16楼2010-05-28 09:41:12
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tianxia9799

新虫 (初入文坛)
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lstt09nk(金币+2):欢迎多多交流~~ 2010-05-29 09:43:36
从你的描述看，问题主要是在于1、要扩增的片段的模板可能没提取出。这是最大可能，2、引物错误，
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见过胡杨乃悟生命之伟大！！！
17楼2010-05-28 11:31:30
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