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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】怎么就是p不出目的片段啊
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wangxueqin

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】怎么就是p不出目的片段啊 已有14人参与

向高手请教：
目前在扩一个片段，已经有人用这对引物扩过，都得到的是800bp的片段，我第一次扩的时候直接用56的退火温度（查文献说这个片段GC含量较高，需较高退火温度，引物不是我们自己设计的，是前人文章中得来的），结果很好，整齐且亮的主带，没有任何杂带，虽然大小不对， 我还是将结果送去测序，可是结果回来根本不是我们要扩的片段中的，连一部分也不是。昨天我又用48的退火温度做了个，可是依旧是只有200bp附近有主带，在800bp附件连杂带也是非常弱的啊。
请问下高手有何方法，可以把800bp的带给扩出来啊，因为前人做过实验证实是可以扩出来的。多谢多谢。
有图
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1楼 2010-05-26 09:42:03
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陈思容

铜虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-05-27 00:05:19
那个退火温度也太低了吧，非特异性扩增，确保模板没问题，然后优化实验条件
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12楼2010-05-26 16:29:53
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liyong1981

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
前人，我想问，现在的学生做的实验，有几个是可信的？你要确定可信，或者把他找过来再做一次
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2楼2010-05-26 09:44:09
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老夏853

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
楼上真强悍 不是不真实 而是在发文章的时候吧稍微有一点含金量的东西都会做一些变动 毕竟也是人 辛苦摸索的条件可以理解 但是 这可是中国学术进步的 一大障碍 ~~
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3楼2010-05-26 09:49:20
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最爱花诗雨

金虫 (正式写手)

穷鬼
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
不好找原因，只能无根据的猜测，如果以前真的做出来，那么按照原来的条件一模一样再做一遍好了，确保操作和试剂都是正确的。
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严于律己，宽以待人
4楼2010-05-26 09:53:33
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