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匿名

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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你一定要在上游加个Nco1吗?Nco1中有个ATG起始密码子,很可能会使的阅读框错读,影响你的表达。
2楼2009-10-17 20:40:50
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gyesang

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小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1、你想怎么个克隆法,先把基因克隆到T载体上呢,还是直接切PCR产物,装到pET载体上?如果先克隆到T载体上你就用不着加保护碱基,如果想直接酶切PCR产物,然后装pET载体,就要加保护碱基了,至少3个,一般为3个
2、 pET有pET28和pET32系列,每种又有abc(+)-之分,要根据你所用的是哪一个载体,才有可能考虑是否对读码框的问题,也就是蛋白在翻译的时候跟标签是in-frame-translation的,你把问题补充完整再帮你看啊
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2009-10-17 20:41:43
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匿名

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4楼2009-10-17 21:04:12
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by mengfei8336 at 2009-10-17 21:04:
那我换个说法,CC ATG G CA TGA ATGACAATTAAAGAAAC……,这段序列加到pET载体上,翻译从第一个ATG开始,在其后第二个密码子是终止密码子。在表达时,能不能得到我想要的蛋白(ATGACAATTAAAGAAAC……翻译的产物)?

完全可以的。
5楼2009-10-18 00:01:00
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)

启动子可以将后面的进行表达。
6楼2009-10-18 00:01:41
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j2

木虫 (正式写手)

只要没错位就没问题
修炼ing,当虫仙……
7楼2009-10-18 10:14:55
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷


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Originally posted by zhuifeng7000 at 2009-10-18 00:01:
启动子可以将后面的进行表达。

有个疑问,我看别人做融合表达的时候需要将第一个基因的终止密码子突变,做共表达需要在第二个基因前加上启动子.

在T7启动子的调控下,翻译由pET载体上的ATG开始翻译(不是从你设计引物上ATG开始),如果在目的基因上ATG翻译之前,先终止一次的话,后面的目的基因在同一个T7启动子的作用下还可以继续翻译吗?

[ Last edited by susizheng on 2009-10-18 at 15:46 ]
Thank-you,so-blue.
8楼2009-10-18 15:34:55
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
如果按照楼主的设计,翻译先在目的基因ATG前面的终止密码子处终止,接着继续翻译目的蛋白,那样pET上的组氨酸标记没有加到目的蛋白上,会不会对以后的纯化带来困难。
Thank-you,so-blue.
9楼2009-10-18 15:40:15
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smurfen

至尊木虫 (著名写手)


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引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2009-10-18 15:40:
如果按照楼主的设计,翻译先在目的基因ATG前面的终止密码子处终止,接着继续翻译目的蛋白,那样pET上的组氨酸标记没有加到目的蛋白上,会不会对以后的纯化带来困难。

可以用C端得His吧
Advances in Prevention of Thermal Runaway in Lithium-Ion Batteries
10楼2009-10-18 15:53:11
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