应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 引物设计求助~
141/2返回列表12下一页
查看: 2142  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

匿名

用户注销 (正式写手)
本帖仅楼主可见

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2009-10-17 20:25:18
已阅   同方向广播   申请BioEPI   回复此楼   编辑   删除   查看我的主页

zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你一定要在上游加个Nco1吗？Nco1中有个ATG起始密码子，很可能会使的阅读框错读，影响你的表达。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2009-10-17 20:40:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1、你想怎么个克隆法，先把基因克隆到T载体上呢，还是直接切PCR产物，装到pET载体上？如果先克隆到T载体上你就用不着加保护碱基，如果想直接酶切PCR产物，然后装pET载体，就要加保护碱基了，至少3个，一般为3个
2、 pET有pET28和pET32系列，每种又有abc(+)-之分，要根据你所用的是哪一个载体，才有可能考虑是否对读码框的问题，也就是蛋白在翻译的时候跟标签是in-frame-translation的，你把问题补充完整再帮你看啊
赞一下(1人) 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2009-10-17 20:41:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (正式写手)
本帖仅楼主可见
赞一下
4楼2009-10-17 21:04:12
已阅   申请BioEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by mengfei8336 at 2009-10-17 21:04:
那我换个说法，CC ATG G CA TGA ATGACAATTAAAGAAAC……，这段序列加到pET载体上，翻译从第一个ATG开始，在其后第二个密码子是终止密码子。在表达时，能不能得到我想要的蛋白（ATGACAATTAAAGAAAC……翻译的产物）？

完全可以的。
回复此楼
5楼2009-10-18 00:01:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
启动子可以将后面的进行表达。
赞一下 回复此楼
6楼2009-10-18 00:01:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

j2

木虫 (正式写手)
只要没错位就没问题
赞一下 回复此楼
修炼ｉｎｇ，当虫仙……
7楼2009-10-18 10:14:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by zhuifeng7000 at 2009-10-18 00:01:
启动子可以将后面的进行表达。

有个疑问，我看别人做融合表达的时候需要将第一个基因的终止密码子突变，做共表达需要在第二个基因前加上启动子.

在T7启动子的调控下，翻译由pET载体上的ATG开始翻译（不是从你设计引物上ATG开始），如果在目的基因上ATG翻译之前，先终止一次的话，后面的目的基因在同一个T7启动子的作用下还可以继续翻译吗？

[ Last edited by susizheng on 2009-10-18 at 15:46 ]
赞一下(1人) 回复此楼
Thank-you，so-blue.
8楼2009-10-18 15:34:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
如果按照楼主的设计，翻译先在目的基因ATG前面的终止密码子处终止，接着继续翻译目的蛋白，那样pET上的组氨酸标记没有加到目的蛋白上，会不会对以后的纯化带来困难。
赞一下(1人) 回复此楼
Thank-you，so-blue.
9楼2009-10-18 15:40:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

smurfen

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2009-10-18 15:40:
如果按照楼主的设计，翻译先在目的基因ATG前面的终止密码子处终止，接着继续翻译目的蛋白，那样pET上的组氨酸标记没有加到目的蛋白上，会不会对以后的纯化带来困难。

可以用C端得His吧
赞一下(1人) 回复此楼
Advances in Prevention of Thermal Runaway in Lithium-Ion Batteries
10楼2009-10-18 15:53:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 mengfei8336 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 考研调剂 +6 来好运来来来 2026-03-21 7/350 2026-03-25 22:43 by 418490947
[考研] 化学调剂一志愿上海交通大学336分-本科上海211 +3 小鱼爱有机 2026-03-25 3/150 2026-03-25 20:13 by qingfeng258
[考研] 招08考数学 +8 laoshidan 2026-03-20 17/850 2026-03-25 17:52 by 一个红太阳
[考研] 284求调剂 +15 Zhao anqi 2026-03-22 15/750 2026-03-25 12:51 by wht0531
[考研] 0854电子信息求调剂 324 +4 Promise-jyl 2026-03-23 4/200 2026-03-25 11:36 by Sugarlight
[考研] 材料调剂 +3 iwinso 2026-03-23 3/150 2026-03-25 11:29 by greychen00
[考研] 0703化学求调剂 +6 奶油草莓. 2026-03-22 7/350 2026-03-25 10:00 by shangxh
[考研] 求调剂一志愿武汉理工大学材料工程（085601） +5 WW.' 2026-03-23 7/350 2026-03-24 14:50 by sprinining
[基金申请] 请教下大家 2026年国家基金申请是双盲审吗？ +3 lishucheng1 2026-03-22 5/250 2026-03-24 08:22 by gltch
[考研] 291求调剂 +8 hhhhxn.. 2026-03-23 8/400 2026-03-23 23:15 by peike
[考研] 269求调剂 +4 我想读研11 2026-03-23 4/200 2026-03-23 21:25 by pswait
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境，总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-23 8/400 2026-03-23 20:36 by Creta
[考研] 一志愿陕师大生物学071000，298分，求调剂 +3 SYA！ 2026-03-23 3/150 2026-03-23 19:09 by macy2011
[考研] 工科0856求调剂 +5 沐析汀汀 2026-03-21 5/250 2026-03-23 17:56 by 海瑟薇-
[考研] 263求调剂 +6 yqdszhdap－ 2026-03-22 9/450 2026-03-23 12:57 by yqdszhdap－
[考研] 308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-21 3/150 2026-03-22 16:54 by i_cooler
[考研] 260求调剂 +3 朱芷琳 2026-03-20 4/200 2026-03-22 15:12 by 朱芷琳
[考研] 279求调剂 +5 红衣隐官 2026-03-21 5/250 2026-03-21 14:59 by lature00
[考研] 一志愿 西北大学 ，070300化学学硕，总分287，双非一本，求调剂。 +4 晨昏线与星海 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:15 by JourneyLucky
[考研] 材料学硕297已过四六级求调剂推荐 +11 adaie 2026-03-19 11/550 2026-03-20 21:30 by laoshidan
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭