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匿名

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1楼 2009-10-17 20:25:18
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★
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引用回帖:
Originally posted by zhuifeng7000 at 2009-10-18 00:01:
启动子可以将后面的进行表达。

有个疑问，我看别人做融合表达的时候需要将第一个基因的终止密码子突变，做共表达需要在第二个基因前加上启动子.

在T7启动子的调控下，翻译由pET载体上的ATG开始翻译（不是从你设计引物上ATG开始），如果在目的基因上ATG翻译之前，先终止一次的话，后面的目的基因在同一个T7启动子的作用下还可以继续翻译吗？

[ Last edited by susizheng on 2009-10-18 at 15:46 ]
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Thank-you，so-blue.
8楼2009-10-18 15:34:55
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
★
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你一定要在上游加个Nco1吗？Nco1中有个ATG起始密码子，很可能会使的阅读框错读，影响你的表达。
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2楼2009-10-17 20:40:50
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
★
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1、你想怎么个克隆法，先把基因克隆到T载体上呢，还是直接切PCR产物，装到pET载体上？如果先克隆到T载体上你就用不着加保护碱基，如果想直接酶切PCR产物，然后装pET载体，就要加保护碱基了，至少3个，一般为3个
2、 pET有pET28和pET32系列，每种又有abc(+)-之分，要根据你所用的是哪一个载体，才有可能考虑是否对读码框的问题，也就是蛋白在翻译的时候跟标签是in-frame-translation的，你把问题补充完整再帮你看啊
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2009-10-17 20:41:43
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匿名

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4楼2009-10-17 21:04:12
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