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匿名

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1楼2009-10-17 20:25:18
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★
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如果按照楼主的设计，翻译先在目的基因ATG前面的终止密码子处终止，接着继续翻译目的蛋白，那样pET上的组氨酸标记没有加到目的蛋白上，会不会对以后的纯化带来困难。
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Thank-you，so-blue.
9楼2009-10-18 15:40:15
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
★
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你一定要在上游加个Nco1吗？Nco1中有个ATG起始密码子，很可能会使的阅读框错读，影响你的表达。
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2楼2009-10-17 20:40:50
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
★
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1、你想怎么个克隆法，先把基因克隆到T载体上呢，还是直接切PCR产物，装到pET载体上？如果先克隆到T载体上你就用不着加保护碱基，如果想直接酶切PCR产物，然后装pET载体，就要加保护碱基了，至少3个，一般为3个
2、 pET有pET28和pET32系列，每种又有abc(+)-之分，要根据你所用的是哪一个载体，才有可能考虑是否对读码框的问题，也就是蛋白在翻译的时候跟标签是in-frame-translation的，你把问题补充完整再帮你看啊
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2009-10-17 20:41:43
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匿名

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4楼2009-10-17 21:04:12
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