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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 载体双酶切回收
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龚宜龙

新虫 (小有名气)

[求助] 载体双酶切回收 已有1人参与

双酶切构建好的载体之后，用试剂盒回收，浓度特别低，很是苦恼，求助各位大神，指点一二!

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1楼 2017-11-03 00:55:33
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xuyuzhi

新虫 (正式写手)
换个盒子，原因太多。菌液量少

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17343151072目前在一道生物，常联系
2楼2017-11-03 08:07:59
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龚宜龙

新虫 (小有名气)
试剂盒应该没有问题，因为师兄以前就是用这个试剂盒回收的，自己也是按照protocol来做的，但是，就是回收率低。做了两次了，第一次切的50uL，第二次切的100uL，虽然效率比第一次的要高一点，但是还是低。且切完之后连接目的片段，转大肠直接就不长了。

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3楼2017-11-03 08:26:00
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前行的璐

新虫 (小有名气)
酶切体系大一点，还有回收的时候多过几遍柱子，
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4楼2017-11-03 21:33:14
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龚宜龙

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 前行的璐 at 2017-11-03 21:33:14
酶切体系大一点，还有回收的时候多过几遍柱子，

我切了个100uL的体系，结果回收后浓度也就不到20，好气人～

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5楼2017-11-04 00:26:16
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龚宜龙

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xuyuzhi at 2017-11-03 08:07:59
换个盒子，原因太多。菌液量少

切的是构建好了的克隆大提质粒，浓度1300还是比较高的，但是自己回收的浓度就是低

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6楼2017-11-04 00:28:00
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rongyujing

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

楼主问题解决了吗？我的也很低，虽说胶回收损失很大，但条带很亮，结果还是很低，后面连接都难
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7楼2017-11-13 18:05:20
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龚宜龙

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by rongyujing at 2017-11-13 18:05:20
楼主问题解决了吗？我的也很低，虽说胶回收损失很大，但条带很亮，结果还是很低，后面连接都难

me too.

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8楼2017-11-14 00:26:10
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a5255661

铜虫 (小有名气)
我也是很低....................
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9楼2017-11-14 18:40:39
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龚宜龙

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by a5255661 at 2017-11-14 18:40:39
我也是很低....................

问题解决了

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10楼2017-11-15 07:44:47
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