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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 毕赤酵母表达蛋白求助
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老狗妹

新虫 (小有名气)

[求助] 毕赤酵母表达蛋白求助 已有1人参与

大家好，本人在表达蛋白上停滞不前，之前用Ecoli 表达目的蛋白，全在包涵体里。转为毕赤酵母表达，结果试了两次还是感觉没有表达出来，选用的是分泌性。附上我24h的图，最右边是x33空载作为对照，最左边是marker。发现中间这些colony和空载差不多，我选了48h的，图片在这里没附上，结果差不多。请问表达能手们，我这样是不是没有表达出来？还有在48h取样的时候闻着味道不对，就是没有第一次香。目前还没有做pellet，因为我每次取的是1ml，pellet本人还不知道怎么lysis。 希望走过路过的朋友能给我些建议。非常感谢！

毕赤酵母表达蛋白求助
20170927 24h induce .jpg
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1楼 2017-09-29 06:36:46
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

老狗妹

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhouxfd at 2017-09-29 09:09:32
我想问一下你有正对着吗？没有的话不能确定你的系统能工作

你好，请问什么是正对照？是其他的蛋白表达吗？我们实验室另外一个人能表达出来，只是蛋白不一样

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3楼2017-09-29 09:14:57
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zhouxfd

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 老狗妹 at 2017-09-29 09:24:03
其实并不特殊。很普通的一个半胱氨酸蛋白。 请问有什么建议给我吗？谢谢...

很难给建议，先测序确定质粒没问题，再问问你们实验室做出来的人吧
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6楼2017-09-29 09:51:42
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zhouxfd

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我想问一下你有正对着吗？没有的话不能确定你的系统能工作
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2楼2017-09-29 09:09:32
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zhouxfd

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 老狗妹 at 2017-09-29 09:14:57
你好，请问什么是正对照？是其他的蛋白表达吗？我们实验室另外一个人能表达出来，只是蛋白不一样
...

如果另一个人能表达出来说明系统工作，问题出在你这个蛋白自身了，估计是个比较特殊的蛋白把
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4楼2017-09-29 09:21:54
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老狗妹

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zhouxfd at 2017-09-29 09:21:54
如果另一个人能表达出来说明系统工作，问题出在你这个蛋白自身了，估计是个比较特殊的蛋白把...

其实并不特殊。很普通的一个半胱氨酸蛋白。 请问有什么建议给我吗？谢谢
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5楼2017-09-29 09:24:03
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老狗妹

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by zhouxfd at 2017-09-29 09:51:42
很难给建议，先测序确定质粒没问题，再问问你们实验室做出来的人吧...

那么请问，我这个胶图有这么多带是什么原因啊？

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7楼2017-09-29 10:38:14
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jinkairui123

铁虫 (正式写手)
我就看看不说话
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武汉金开瑞生物，提供核酸和蛋白的整体研究方案
8楼2017-09-30 10:34:06
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wrxnyd54

木虫 (著名写手)
必须顶
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9楼2017-09-30 12:55:47
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微微皮蛋

新虫 (初入文坛)
楼主，我的也是，跟空载没区别，但是检测有目的基因，你的解决了吗

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10楼2018-01-25 21:12:01
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