| 查看: 663 | 回复: 0 | ||
belinda227木虫 (小有名气)
|
[求助]
再次求助毕赤酵母无法分泌表达
|
|
belinda227 wrote: 我的蛋白是个同源四聚体，每个亚基的分子量为57KD，是胞内酶，AT含量很高，达到60%。选取亚基的片段与pPICZαA构建了重组表达载体，电转化SMD-1168宿主菌。前期经过抗生素梯度抗性筛选，并经PCR验证正确。根据操作手册，用甲醇诱导其表达，在上清液中一直无法测到酶活。请各位毕赤酵母表达高手指点迷津，谢谢了！ 如上所述，是我前期在论坛上求助了帖子。该蛋白基因克隆自一种酵母，在大肠杆菌中实现了活力胞内表达，证实其为同源四聚体。经氨基酸序列分析发现N-端27个氨基酸可能是个线粒体前导肽（引导蛋白进入线粒体后会被切除）。是否有可能是该预测的前导肽的存在影响了在毕赤酵母SMD-1168中的分泌表达？或者还是有其他原因（如基因中存在信号肽切割位点，或者多亚基如何聚合等等）？现在正犹豫是否需要切除该前导肽序列，重新做一遍。但由于时间紧迫，故想先和大家探讨该种原因的可能性。非常感谢！ |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有250人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
找到一些相关的精华帖子，希望有用哦~
毕赤酵母表达
已经有11人回复
- 毕赤酵母表达出蛋白但没有活性
已经有18人回复
- 毕赤酵母表达的蛋白无活性
已经有8人回复
- 大家见到过毕赤酵母表达出的外源蛋白分子量比实际分子量小吗，而且还有活性？
已经有20人回复
- 求助：毕赤酵母电转化
已经有5人回复
- 毕赤酵母转化表达
已经有13人回复
- 求助毕赤酵母电转化问题
已经有6人回复
- 【求助/交流】毕赤酵母表达用培养基BMGY BMMY的详细配制方法，请赐教。
已经有14人回复
- 【求助/交流】毕赤酵母胞外表达上清无活性，但胞内测得活性，WHY?
已经有4人回复
- 【求助/交流】毕赤酵母表达胞外蛋白，sds电泳后看不到条带
已经有7人回复
- 【求助/交流】有人用过毕赤酵母GS115吗？
已经有15人回复
- 【求助/交流】毕赤酵母表达蛋白的奇怪现象
已经有7人回复
- 【求助/交流】推荐酿酒酵母、毕赤酵母胞内表达质粒
已经有10人回复
- 【求助/交流】毕赤酵母发酵后期酵母变红色？
已经有8人回复
- 【求助/交流】求X-33毕赤酵母菌
已经有4人回复
- 毕赤酵母表达（总是整合不上）
已经有17人回复
点击这里搜索更多相关资源科研从小木虫开始，人人为我，我为人人