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老狗妹

新虫 (小有名气)

[求助] 毕赤酵母表达蛋白求助 已有1人参与

大家好,本人在表达蛋白上停滞不前,之前用Ecoli 表达目的蛋白,全在包涵体里。转为毕赤酵母表达,结果试了两次还是感觉没有表达出来,选用的是分泌性。附上我24h的图,最右边是x33空载作为对照,最左边是marker。发现中间这些colony和空载差不多,我选了48h的,图片在这里没附上,结果差不多。请问表达能手们,我这样是不是没有表达出来?还有在48h取样的时候闻着味道不对,就是没有第一次香。目前还没有做pellet,因为我每次取的是1ml,pellet本人还不知道怎么lysis。 希望走过路过的朋友能给我些建议。非常感谢!

毕赤酵母表达蛋白求助
20170927 24h induce .jpg
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老狗妹

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhouxfd at 2017-09-29 09:09:32
我想问一下你有正对着吗?没有的话不能确定你的系统能工作

你好,请问什么是正对照?是其他的蛋白表达吗?我们实验室另外一个人能表达出来,只是蛋白不一样

发自小木虫IOS客户端
3楼2017-09-29 09:14:57
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zhouxfd

木虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 老狗妹 at 2017-09-29 09:24:03
其实并不特殊。很普通的一个半胱氨酸蛋白。 请问有什么建议给我吗?谢谢...

很难给建议,先测序确定质粒没问题,再问问你们实验室做出来的人吧
6楼2017-09-29 09:51:42
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普通回帖

zhouxfd

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我想问一下你有正对着吗?没有的话不能确定你的系统能工作
2楼2017-09-29 09:09:32
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zhouxfd

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 老狗妹 at 2017-09-29 09:14:57
你好,请问什么是正对照?是其他的蛋白表达吗?我们实验室另外一个人能表达出来,只是蛋白不一样
...

如果另一个人能表达出来说明系统工作,问题出在你这个蛋白自身了,估计是个比较特殊的蛋白把
4楼2017-09-29 09:21:54
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老狗妹

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by zhouxfd at 2017-09-29 09:21:54
如果另一个人能表达出来说明系统工作,问题出在你这个蛋白自身了,估计是个比较特殊的蛋白把...

其实并不特殊。很普通的一个半胱氨酸蛋白。 请问有什么建议给我吗?谢谢
5楼2017-09-29 09:24:03
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老狗妹

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by zhouxfd at 2017-09-29 09:51:42
很难给建议,先测序确定质粒没问题,再问问你们实验室做出来的人吧...

那么请问,我这个胶图有这么多带是什么原因啊?

发自小木虫IOS客户端
7楼2017-09-29 10:38:14
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jinkairui123

铁虫 (正式写手)

我就看看不说话
武汉金开瑞生物,提供核酸和蛋白的整体研究方案
8楼2017-09-30 10:34:06
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wrxnyd54

木虫 (著名写手)


必须顶
9楼2017-09-30 12:55:47
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微微皮蛋

新虫 (初入文坛)

楼主,我的也是,跟空载没区别,但是检测有目的基因,你的解决了吗

发自小木虫Android客户端
10楼2018-01-25 21:12:01
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