版块导航: 正在加载中...

客户端APP下载

登录注册

应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜

>论坛更新日志 (4611)
>休闲灌水 (479)
>虫友互识 (388)
>导师招生 (343)
>文献求助 (331)
>论文投稿 (188)
>博后之家 (174)
>招聘信息布告栏 (134)
>硕博家园 (67)
>学术会议 (65)
>考博 (59)
>找工作 (45)
>基金申请 (40)
>教师之家 (34)
>育儿交流 (33)
>有机交流 (30)

jingyko

铜虫 (初入文坛)

应助: 2 (幼儿园)
金币: 90.1
散金: 5
帖子: 36
在线: 20.1小时
虫号: 2341284
注册: 2013-03-12
性别: GG
专业: 细胞生长与分裂

[交流] 毕赤酵母GS115胞内表达求助

本人现在在做毕赤酵母胞内表达的实验。酵母用的gs115，载体用的是ppic3.5k。用sal1线性化，插入his4位点。
在筛选出重组子后，做诱导，破碎酵母提取蛋白后做western发现无论是加甲醇还是不加的，都有蛋白的表达，而且表达量视乎没有差异（看western的信号强度很接近）。
我怀疑是不是重组子没有筛选好，就提取了基因组做pcr验证，用的引物是5-AOX1和3-AOX1.然后疑惑了
没有出现表达手册上的2条带。 ppic3.5k ，和ppic3.5k-目的基因，只有200-300 的带。gs115有一天2。2k的带。但是都没有目的基因860左右的带。哪位老师能帮我分析下，200-300的带是怎么回事？怎么样能验证插入了进去（我只是利用的是营养缺陷筛选的）？

20130503pcr_副本.jpg

» 猜你喜欢

ADC标杆分子T-DM1全解析：从结构设计到实验室应用的技术要点已经有0人回复
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？已经有0人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有73人回复
His标签蛋白纯化怎么才能快？已经有0人回复
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析已经有0人回复
KRAS G12V(ON) 选择性抑制剂 RMC-5127：从三元复合物机制到科研应用已经有0人回复
SHP2 变构抑制剂 Sitneprotafib：从作用机制到科研试剂选型要点已经有0人回复
PRMT5·MTA 抑制剂 MRTX1719 的科研应用已经有0人回复
SW033291 科研使用解析：分子特征、储存与实验获取要点已经有0人回复
泛 RAS 抑制新思路：大环肽拟似物如何同时牵住突变型与野生型 RAS？已经有0人回复
TYK2/JAK1 双靶点工具化合物 Brepocitinib：激酶选择性、研究进展与实验应用全解析已经有0人回复

1楼 2013-05-04 08:14:52

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

智能机器人

Robot (super robot)

我们都爱小木虫

找到一些相关的精华帖子，希望有用哦~

PGAPZA载体的使用已经有6人回复
大家做GS115毕赤酵母表达时流加甲醇是怎么灭菌的？已经有16人回复
毕赤酵母发酵问题求助已经有5人回复
毕赤酵母电转化问题求助已经有26人回复
毕赤酵母在YPD培养基中培养时总是出现颗粒状现象，求助已经有13人回复
关于毕赤酵母gs115可否用转化化学转化已经有6人回复
有用过pPICZB质粒的虫友吗？已经有8人回复
求助毕赤酵母电转化问题已经有6人回复
PICZaA在GS115内表达跨膜蛋白已经有30人回复
求助：毕氏酵母GS115感受态细胞的制备及转化方法已经有5人回复
【求助/交流】毕赤酵母表达用培养基BMGY BMMY的详细配制方法，请赐教。已经有14人回复
【求助/交流】请问我这个毕赤GS115表达是怎么回事？已经有4人回复
【求助/交流】毕赤酵母工程菌种保藏DMSO/甘油已经有8人回复
【求助/交流】有人用过毕赤酵母GS115吗？已经有15人回复
【求助/交流】毕赤酵母发酵消泡剂问题已经有12人回复
【求助/交流】推荐酿酒酵母、毕赤酵母胞内表达质粒已经有10人回复
【求助/交流】毕赤酵母发酵后期酵母变红色？已经有8人回复
【求助/交流】GS115在MGY液体培养基内不生长已经有6人回复

点击这里搜索更多相关资源

科研从小木虫开始，人人为我，我为人人

相关版块跳转我要订阅楼主 jingyko 的主题更新