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jingyko铜虫 (初入文坛)
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[交流]
毕赤酵母GS115胞内表达 求助
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本人现在在做毕赤酵母胞内表达的实验。酵母用的gs115，载体用的是ppic3.5k。用sal1线性化，插入his4位点。 在筛选出重组子后，做诱导，破碎酵母提取蛋白后做western发现无论是加甲醇还是不加的，都有蛋白的表达，而且表达量视乎没有差异（看western的信号强度很接近）。 我怀疑是不是重组子没有筛选好，就提取了基因组做pcr验证 ，用的引物是5-AOX1和3-AOX1.然后疑惑了 没有出现表达手册上的2条带。 ppic3.5k ，和ppic3.5k-目的基因，只有200-300 的带。gs115有一天2。2k的带。但是都没有目的基因860左右的带。哪位老师能帮我分析下，200-300的带是怎么回事？怎么样能验证插入了进去（我只是利用的是营养缺陷筛选的）？  20130503pcr_副本.jpg |
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