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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 过表达载体的连接转化
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小小于不吃鱼

新虫 (初入文坛)

[交流] 过表达载体的连接转化 已有2人参与

求教大神，我做表达载体的连接，之后转化到感受态细胞，但是涂板之后只长十几个斑，并且全是白斑。出现这个问题的是什么原因呢？还有感受态细胞可以由DH5α换成农杆菌吗？这两个不同的作用是什么?感谢感谢

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1楼 2017-09-23 13:21:51
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yangmeng0711

新虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-09-23 20:40:45
既然长了就挑几个点摇菌提质粒，做验证，那个D感受细胞是用来扩增质粒的

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2楼2017-09-23 14:22:29
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小小于不吃鱼

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yangmeng0711 at 2017-09-23 14:22:29
既然长了就挑几个点摇菌提质粒，做验证，那个D感受细胞是用来扩增质粒的

我挑了 做了菌斑PCR 但是都不是目的条带 那可以把DH5α换成农杆菌吗？

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3楼2017-09-24 07:45:45
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伤何处

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-09-24 23:05:53
DH5a 感受态是用来做载体克隆的，农杆菌是用来后期植物转化的。一般都是在大肠杆菌里确定序列了，再提取质粒 转化农杆菌。
你是做的蓝白斑筛选的么，如果是的话 都是白斑应该是比较好的结果啊
如果不是，那肯定都是白斑。
做菌液PCR的时候 可以拿之前的PCR产物或载体做阳性对照，看看
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对也罢，错也罢；正也罢，逆也罢；通途也好，崎岖无妨……但问，吾心坚否？若坚，纵使歧路，以铁心，贯穿而过，亦为大道！不坚，便是坦途，也难登临绝顶，观险峰
4楼2017-09-24 16:23:27
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小小于不吃鱼

新虫 (初入文坛)
我的是链霉菌，选择的表达载体是表达链霉菌的载体。它的克隆菌株是DH5α，所以没用农杆菌。

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5楼2017-10-09 09:45:38
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