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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 双酶切后无目的条带
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amyz327

新虫 (小有名气)

[交流] 双酶切后无目的条带

在做构建，质粒和目的片段分别进行双酶切，酶切后没有了目的条带，只有一大片拖尾图案。之后做了验证，1:酶切体系准备好后，吸取一部分电泳，目的条带很清晰，酶切1h后再电泳，结果没目的条带了。2:分别进行但酶切，同样没了目的条带。不管是质粒还是目的片段都一样。质粒是pet28a，酶切位点也是常用的ndeI和XhoI，希望高手能够帮帮忙。图中1.2.3泳道为目的条带，6泳道为酶切后的

双酶切后无目的条带


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1楼 2017-04-13 16:06:33
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yesucao

木虫 (正式写手)
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-04-14 07:50:39
载体和目的片段分别是多大，要是载体很大，目的片段小，电泳时小片段浓度低有可能看不到条带

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3楼2017-04-13 23:05:30
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lusandanooo

银虫 (小有名气)
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-04-15 22:28:01
质粒我遇到过切了没有的情况，原因是质粒提的质量不好，OD值偏大，有蛋白酶污染，做酶切的过程中质粒降解掉了，片段我一般做产物回收然后酶切，从来没遇到过切没有的情况，难道是片段里有酶切位点，所以被切碎了？
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amyz327
毕了业真开心嘻嘻嘻嘻嘻
5楼2017-04-14 15:08:08
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露娜823

新虫 (初入文坛)
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把酶切体系说一下。还有不是很明白你的目的片段的意思，是说连着t载体的目的片段吗？

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10楼2017-04-16 13:54:13
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普通回帖

懒惰毁人生

新虫 (初入文坛)
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你这胶跑的，连加样孔都不见了，而且，你说的第六孔道在哪？看不清啊！

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amyz327
2楼2017-04-13 19:12:42
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1993云崖

木虫 (小有名气)
载体对不对啊

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暮雪千山，厚积薄发
4楼2017-04-14 09:55:02
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gengxin60
6楼2017-04-14 15:27:07
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amyz327

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引用回帖:
2楼: Originally posted by 懒惰毁人生 at 2017-04-13 19:12:42
你这胶跑的，连加样孔都不见了，而且，你说的第六孔道在哪？看不清啊！

因为是侧着拍的，拍的不好，实际是我的片段跑出来是引物二聚体一样

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7楼2017-04-15 16:27:16
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amyz327

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引用回帖:
5楼: Originally posted by lusandanooo at 2017-04-14 15:08:08
质粒我遇到过切了没有的情况，原因是质粒提的质量不好，OD值偏大，有蛋白酶污染，做酶切的过程中质粒降解掉了，片段我一般做产物回收然后酶切，从来没遇到过切没有的情况，难道是片段里有酶切位点，所以被切碎了？

没有酶切位点，我检查了，质粒和目的片段跑出来都是同样的问题。

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8楼2017-04-15 16:28:03
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a1353601094

新虫 (初入文坛)
★
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你酶切10分钟就去跑胶试试
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9楼2017-04-15 23:48:17
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