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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 双酶切后无目的条带
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heyongchai

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
单酶切肯定是切不出目的条带的，只能将重组质粒切成线形，你讲单酶切后的产物和没有经过酶切的重组质粒同时跑电泳看一下，如果单酶切后的产物跑出一条带并且和重组质粒一样大小说明根本没有切开，如果跑出俩带，说明酶切不完全，如果跑出一条带，但是和重组质粒跑的速率不同，说明单酶切完全。建议做双酶切的时候做一下时间梯度，如5min ,10min,15min 20min 以此类推看一下结果如何。
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11楼2017-04-17 11:19:19
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lusandanooo

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by amyz327 at 2017-04-15 16:28:03
没有酶切位点，我检查了，质粒和目的片段跑出来都是同样的问题。
...

不知道你点样点了多少，我20ul体系酶切500ng质粒，一般点10ul看，有时切下来的目的条带还看不太清，如果你确定载体和片段都没问题，你要不试试多切多一点？
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毕了业真开心嘻嘻嘻嘻嘻
12楼2017-04-18 14:46:44
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lusandanooo

银虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by lusandanooo at 2017-04-18 14:46:44
不知道你点样点了多少，我20ul体系酶切500ng质粒，一般点10ul看，有时切下来的目的条带还看不太清，如果你确定载体和片段都没问题，你要不试试多切多一点？...

还有，做验证我一般用快酶切，15min左右
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毕了业真开心嘻嘻嘻嘻嘻
13楼2017-04-18 14:47:30
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fsy3224502

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
跑胶之前，需要更换新鲜的电泳液，长期使用的电泳液中可能有DNase

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14楼2017-04-19 00:47:27
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981579976

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by lusandanooo at 2017-04-14 15:08:08
质粒我遇到过切了没有的情况，原因是质粒提的质量不好，OD值偏大，有蛋白酶污染，做酶切的过程中质粒降解掉了，片段我一般做产物回收然后酶切，从来没遇到过切没有的情况，难道是片段里有酶切位点，所以被切碎了？

你后来是如何改善质粒提取的质量问题的呢

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15楼2017-04-20 21:51:12
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爱萌的小天使

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你的是快切酶么？你切了多久，多大的体系，
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16楼2017-04-21 10:40:33
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爱萌的小天使

铁虫 (初入文坛)
你的酶是快切酶吧，体系用的是多大的，你做了菌液PCR么?
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17楼2017-04-21 10:41:44
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a5255661

铜虫 (小有名气)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by yesucao at 2017-04-13 23:05:30
载体和目的片段分别是多大，要是载体很大，目的片段小，电泳时小片段浓度低有可能看不到条带

你的遇到这种情况时，大小片段各是多少
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18楼2017-12-05 14:19:16
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