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amyz327

新虫 (小有名气)

[交流] 双酶切后无目的条带

在做构建,质粒和目的片段分别进行双酶切,酶切后没有了目的条带,只有一大片拖尾图案。之后做了验证,1:酶切体系准备好后,吸取一部分电泳,目的条带很清晰,酶切1h后再电泳,结果没目的条带了。2:分别进行但酶切,同样没了目的条带。不管是质粒还是目的片段都一样。质粒是pet28a,酶切位点也是常用的ndeI和XhoI,希望高手能够帮帮忙。图中1.2.3泳道为目的条带,6泳道为酶切后的

双酶切后无目的条带


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heyongchai

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
单酶切肯定是切不出目的条带的,只能将重组质粒切成线形,你讲单酶切后的产物和没有经过酶切的重组质粒同时跑电泳看一下,如果单酶切后的产物跑出一条带并且和重组质粒一样大小说明根本没有切开,如果跑出俩带,说明酶切不完全,如果跑出一条带,但是和重组质粒跑的速率不同,说明单酶切完全。建议做双酶切的时候做一下时间梯度,如5min ,10min,15min 20min 以此类推看一下结果如何。
11楼2017-04-17 11:19:19
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懒惰毁人生

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你这胶跑的,连加样孔都不见了,而且,你说的第六孔道在哪?看不清啊!

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» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2017-04-13 19:12:42
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yesucao

木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-04-14 07:50:39
载体和目的片段分别是多大,要是载体很大,目的片段小,电泳时小片段浓度低有可能看不到条带

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3楼2017-04-13 23:05:30
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1993云崖

木虫 (小有名气)

暮雪千山,厚积薄发
4楼2017-04-14 09:55:02
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