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amyz327

新虫 (小有名气)

[交流] 双酶切后无目的条带

在做构建,质粒和目的片段分别进行双酶切,酶切后没有了目的条带,只有一大片拖尾图案。之后做了验证,1:酶切体系准备好后,吸取一部分电泳,目的条带很清晰,酶切1h后再电泳,结果没目的条带了。2:分别进行但酶切,同样没了目的条带。不管是质粒还是目的片段都一样。质粒是pet28a,酶切位点也是常用的ndeI和XhoI,希望高手能够帮帮忙。图中1.2.3泳道为目的条带,6泳道为酶切后的

双酶切后无目的条带


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yesucao

木虫 (正式写手)

★ ★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-04-14 07:50:39
载体和目的片段分别是多大,要是载体很大,目的片段小,电泳时小片段浓度低有可能看不到条带

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3楼2017-04-13 23:05:30
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lusandanooo

银虫 (小有名气)

★ ★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-04-15 22:28:01
质粒我遇到过切了没有的情况,原因是质粒提的质量不好,OD值偏大,有蛋白酶污染,做酶切的过程中质粒降解掉了,片段我一般做产物回收然后酶切,从来没遇到过切没有的情况,难道是片段里有酶切位点,所以被切碎了?

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毕了业真开心嘻嘻嘻嘻嘻
5楼2017-04-14 15:08:08
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露娜823

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
把酶切体系说一下。还有不是很明白你的目的片段的意思,是说连着t载体的目的片段吗?

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10楼2017-04-16 13:54:13
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普通回帖

懒惰毁人生

新虫 (初入文坛)


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你这胶跑的,连加样孔都不见了,而且,你说的第六孔道在哪?看不清啊!

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2楼2017-04-13 19:12:42
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1993云崖

木虫 (小有名气)

暮雪千山,厚积薄发
4楼2017-04-14 09:55:02
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6楼2017-04-14 15:27:07
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amyz327

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 懒惰毁人生 at 2017-04-13 19:12:42
你这胶跑的,连加样孔都不见了,而且,你说的第六孔道在哪?看不清啊!

因为是侧着拍的,拍的不好,实际是我的片段跑出来是引物二聚体一样

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7楼2017-04-15 16:27:16
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amyz327

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by lusandanooo at 2017-04-14 15:08:08
质粒我遇到过切了没有的情况,原因是质粒提的质量不好,OD值偏大,有蛋白酶污染,做酶切的过程中质粒降解掉了,片段我一般做产物回收然后酶切,从来没遇到过切没有的情况,难道是片段里有酶切位点,所以被切碎了?

没有酶切位点,我检查了,质粒和目的片段跑出来都是同样的问题。

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8楼2017-04-15 16:28:03
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a1353601094

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你酶切10分钟就去跑胶试试
9楼2017-04-15 23:48:17
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