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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 重组质粒菌落PCR无结果
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windycui

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] 重组质粒菌落PCR无结果

如题，目的片段双酶切后与双酶切载体连接，然后转入感受态细胞，在amp+的平板上长出菌落，但是用菌落直接PCR或者挑到液体里用菌液PCR均没有目的条带。已经尝试降低退火温度，仍然没有条带。同期以双酶切载体单独转入感受态细胞的平板不长菌，请问各位虫友是什么问题？
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1楼 2013-11-12 15:52:44
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xiaopeiliang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
windycui: 金币+2 2013-11-13 10:33:04
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2013-11-13 17:46:11
1.对照不长菌并不能代表你的连接体系长出的就不是自连
2.如果菌体能够在液体里，P不出来就提下质粒吧，这样就不至于纠结了，不对就不对，没有必要找原因，很多情况下解释不清楚
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2楼2013-11-12 16:40:55
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jasco

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
windycui: 金币+2 2013-11-13 10:33:18
与其纠结菌落/菌液pcr,不如提质粒鉴定。
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3楼2013-11-12 17:19:50
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