24小时热门版块排行榜

>论坛更新日志 (3834)
>虫友互识 (555)
>导师招生 (282)
>考博 (240)
>文献求助 (211)
>基金申请 (175)
>休闲灌水 (119)
>文学芳草园 (61)
>硕博家园 (54)
>仿真模拟 (45)
>博后之家 (43)
>论文投稿 (39)
>考研 (36)
>招聘信息布告栏 (28)
>找工作 (24)
>教师之家 (21)

返回列表

windycui

铁杆木虫 (正式写手)

应助: 4 (幼儿园)
金币: 7249.7
散金: 140
红花: 5
帖子: 348
在线: 141.4小时
虫号: 1448033
注册: 2011-10-18
专业: 分子与进化生态学

[求助] 重组质粒菌落PCR无结果

如题，目的片段双酶切后与双酶切载体连接，然后转入感受态细胞，在amp+的平板上长出菌落，但是用菌落直接PCR或者挑到液体里用菌液PCR均没有目的条带。已经尝试降低退火温度，仍然没有条带。同期以双酶切载体单独转入感受态细胞的平板不长菌，请问各位虫友是什么问题？

回复此楼

» 猜你喜欢

广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生已经有0人回复
化工申博已经有3人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有170人回复
申博自荐已经有3人回复
广西民族大学化学化工学院化学工程与技术学硕，材料化工专硕调剂名额充足！已经有0人回复
透明质酸酶的作用机制：如何实现药物递送已经有0人回复
爱思维尔旗下LWT投稿已经有9人回复
替拉扎明为缺氧选择性细胞毒药物研究提供新思路已经有0人回复
拉坦前列腺素(Latanoprost)：前列腺素F2α衍生物如何成为青光眼一线用药已经有0人回复
卟啉家族中的明星分子：MESO-四(3,5-二溴-4-羟基苯基)卟啉的性质与制备已经有1人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

蓝白斑筛选白色菌落PCR无条带已经有12人回复
农杆菌感受态细胞是否有质粒已经有3人回复
PCR后，质粒模板消失了，到底是什么原因啊？有没有遇到同样问题的同学啊？？已经有4人回复
求助：做克隆的时候SOC培养基如果污染的话，后面菌落长出来，做PCR会有什么后果？已经有5人回复
奇怪的连接反应已经有15人回复
质粒ＰＣＲ扩不出目的条带，且有杂带，但是直接测序有结果？为什么？？？？？已经有7人回复
菌落PCR与扩繁后提取质粒PCR 已经有5人回复
real time PCR NTC 阳性扩增已经有5人回复
质粒PCR用来验证阳性的可靠性已经有18人回复
转化后菌液PCR鉴定，没有目的条带已经有15人回复
TA克隆测序结果老是显示空载，这是为什么呢？？已经有11人回复
连接转化后挑菌落，测序是混合克隆，是怎么回事？已经有9人回复
菌液pcr出来后，质粒提不出，测序老失败？已经有6人回复
关于PCR整个质粒的问题已经有7人回复
菌液PCR没东西，但是提完质粒能跑出来条带，为什么啊？已经有16人回复
质粒PCR大小正确，可是双酶切切不开已经有8人回复
关于质粒的PCR 已经有5人回复
菌落PCR无条带已经有19人回复
菌液PCR是阳性，却提不出来阳性质粒！求助已经有31人回复
【问题反馈】一对引物扩出来的产物测序后竟然是很多质粒的PCR产物，再怎么区分呢？已经有10人回复
【求助/交流】怎样区分空载和重组质粒？已经有9人回复

1楼 2013-11-12 15:52:44

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

xiaopeiliang

金虫 (小有名气)

应助: 21 (小学生)
金币: 349.1
散金: 75
红花: 6
帖子: 151
在线: 70.4小时
虫号: 1044898
注册: 2010-06-21
性别: GG
专业: 食品科学基础

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
windycui: 金币+2 2013-11-13 10:33:04
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2013-11-13 17:46:11

1.对照不长菌并不能代表你的连接体系长出的就不是自连
2.如果菌体能够在液体里，P不出来就提下质粒吧，这样就不至于纠结了，不对就不对，没有必要找原因，很多情况下解释不清楚

赞一下

回复此楼

2楼2013-11-12 16:40:55

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

jasco

木虫 (正式写手)

MolEPI: 1
应助: 17 (小学生)
金币: 1626.1
红花: 3
帖子: 991
在线: 82小时
虫号: 287776
注册: 2006-10-21
专业: 生物化学

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
windycui: 金币+2 2013-11-13 10:33:18

与其纠结菌落/菌液pcr,不如提质粒鉴定。

赞一下

回复此楼

3楼2013-11-12 17:19:50

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

相关版块跳转我要订阅楼主 windycui 的主题更新

返回列表