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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 测序无信号
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泽夕

新虫 (初入文坛)

[求助] 测序无信号

我将3416bp的片段从一个载体上切下来，回收后连到另一个4.8K的载体上，PCR有条带，提质粒后双酶切有目的带，可是测序总是无信号，我该怎么办？做了几次都是这样的

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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1楼 2013-07-14 11:51:22
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
泽夕(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物版块 期待你的精彩和更详细的解答。 2013-07-15 11:17:26
有的是什么引物测序的，载体上的引物还是？既然你PCR有条带，你可以用PCR引物测序试一次
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-07-14 14:57:55
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泽夕

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-07-14 14:57:55
有的是什么引物测序的，载体上的引物还是？既然你PCR有条带，你可以用PCR引物测序试一次

目的片段的自己的引物，就是用PCR引物测的序。别人跟我有可能是PCR假阳性，我就把提的质粒也做了PCR，也可以扩的出来，而且目的带也很亮，但是特异性不是很好，有些非特异性的带
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3楼2013-07-17 22:04:52
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-21 08:14:15
换测序的引物吧,
或者就是把你做PCR的酶参一点到测序反应里面. 我碰到过pfu扩不出来, 但是普通Tag可以扩出来, 而且扩得很好. (或许和某段DNA的特殊结构有关系)
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4楼2013-07-18 00:22:03
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泽夕

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by bullfrog325 at 2013-07-18 00:22:03
换测序的引物吧,
或者就是把你做PCR的酶参一点到测序反应里面. 我碰到过pfu扩不出来, 但是普通Tag可以扩出来, 而且扩得很好. (或许和某段DNA的特殊结构有关系)

今天把PCR产物回收的拿去测序了，看看结果怎么样
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5楼2013-07-18 19:23:27
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