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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » elisa显色问题
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lll940219

新虫 (初入文坛)

[求助] elisa显色问题 已有2人参与

刚刚开始接触生物这方面，想请教各位大神几个基础的问题
1. 酶标抗体如果没与抗原结合，加入底物后会发生显色吗？如果会的话，得到的结果不是不准确了？

2. 待测抗原与固定抗体结合后进行洗涤，未结合的抗原被洗掉不会使原本样品中的抗原量降低吗？

新人感到很迷茫，希望有有人能回复下，跪谢！
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1楼 2016-10-19 00:17:07
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lll940219

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wuhu0612331 at 2016-10-19 04:24:54
问题1,单独酶标抗体就可以与底物反应，问题2再测抗原浓度时有一个饱和浓度，如果从高到底稀释，起初的od值没什么变化

再请教一下问题一~如果直接可以反应，那不是即使酶标抗体没有与抗原结合也同样会显色，这样怎么确定抗原的量呢？
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3楼2016-10-19 09:30:29
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wuhu0612331

铜虫 (正式写手)
问题1,单独酶标抗体就可以与底物反应，问题2再测抗原浓度时有一个饱和浓度，如果从高到底稀释，起初的od值没什么变化

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2楼2016-10-19 04:24:54
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wuhu0612331

铜虫 (正式写手)
那你包被的就是抗原喽，所以首先要做一个抗原包被的梯度出来。选择一个最合适的包被浓度。

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4楼2016-10-19 23:20:45
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biotech_zhou

木虫 (著名写手)

待人以诚：专业/专注/专心

【答案】应助回帖

建议先读懂原理和实验步骤，你加显色液之前还要洗板子，没有结合的酶标抗体会被洗掉；至于抗原量太大，可以先稀释后再进行测定，事先做预实验~~~
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5楼2016-12-22 14:10:42
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