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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 抗体/Elisa » 有关间接竞争ELISA及标品稀释问题
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seven拂晓

新虫 (初入文坛)

[求助] 有关间接竞争ELISA及标品稀释问题 已有2人参与

各位高手，本人研一，做的是基因工程抗体，最后一步要利用间接竞争ELISA测抑制率。我以前从没接触过ELISA，所以实验中遇到了很多问题，恳请高手们耐心解答哈
      我的标品是氰戊菊酯，是把氰戊菊酯溶于甲醇，配成1000ppm的。试验时，用PBS稀释成10ppm，1ppm，0.1ppm。空白对照是把标品换成PBS。
      昨天，大老板莅临指导，说这样做有问题。第一，对照组里没有甲醇，这样会不会对试验结果又影响？第二，氰戊菊酯在水中的溶解度非常低（小于10μg/L),我在稀释过程中可能会有一部分氰戊菊酯析出，导致实际加入标品的量偏小。
      这两个问题，大家能不能帮我解答一下，并帮我想想解决方法。
     我做的间接竞争ELISA步骤如下：
  1.包板过夜
2.乳粉封闭
3.加标品及样品（样品就是我做的基因工程抗体）（空白对照是加PBS及样品）
4.加二抗
5.显色
6.终止
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1楼 2014-02-19 23:41:36
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youlinglyw

荣誉版主 (著名写手)

一匡天下

优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
seven拂晓: 金币+5, ★有帮助 2014-02-25 12:56:04
个人感觉
第一，没有甲醇肯定不行，对照组一定要跟样品组只差一个成分
第二，析出问题，既然都选择用甲醇溶解了，就不是问题了吧
欢迎楼下大神
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天行健
2楼2014-02-20 15:08:15
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xiaxzhp

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
seven拂晓: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2014-03-13 11:44:01
1、你用PBS在稀释标准品的时候稀释倍数比较大，所以配制的标准品梯度里面含有的甲醇醇量是比较小的，这点微量的甲醇量在Elisa中没有太大影响。
2、药物在水中溶解度小，虽说高浓度是已经用甲醇溶解了的，但是不排除在用PBS梯度稀释的时候其溶解度发生改变的情况而导致药物析出（这个我曾经遇到过此类现象）
建议你在做标准品稀释的时候，在PBS中加上10~20%的甲醇，此浓度的甲醇量对你的Elisa检测影响不是特别大。
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3楼2014-03-12 15:16:49
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