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289363400铁杆木虫 (知名作家)
凌乱前进方向
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[求助]
急切求助，ELISA空白孔显色 已有4人参与
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前段时间一直没有问题的，OD450在0.1以下，最近不知道怎么了，空白孔的颜色一直非常明显，几乎与阳性孔没有分别。 我以100微升PBS加100微升包被缓冲液（0.1 M NaCO3，pH 9.6）在4℃过夜包被。 第二天加封闭液，37℃，2h。 加入HRP标记的抗体，37℃，1h。 加入TMB底物缓冲液，结果颜色非常明显。 我分析过可能的影响因素，比如： 1.封闭液试过5%脱脂奶粉、1%BSA; 2.HRP标记的抗体的浓度尝试过1:5000，1:10000和1:15000； 3.实验用的PBS和PBST重新配置； 4.尝试不去过夜包被，而直接从封闭开始； 以上实验的结果全部为空白孔显色！这些实验基本排除了封闭液、包被液、PBS、PBST的问题。 我也尝试过直接向酶标孔中加入显色液，结果是没有颜色的，这也就排除了显色液的问题。 最后我怀疑可能是抗体的问题，但是抗体能有什么问题啊？ 求救！ |
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