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elisa显色问题 已有2人参与
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刚刚开始接触生物这方面，想请教各位大神几个基础的问题 1. 酶标抗体如果没与抗原结合，加入底物后会发生显色吗？如果会的话，得到的结果不是不准确了？ 2. 待测抗原与固定抗体结合后进行洗涤，未结合的抗原被洗掉不会使原本样品中的抗原量降低吗？ 新人感到很迷茫，希望有有人能回复下，跪谢！ |
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wuhu0612331
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【答案】应助回帖
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楼主应该是在用双抗夹心法检测抗原，抗体1包被，和抗原反应，然后加酶标抗体反应，最后显色。 问题1：你说的这种情况是存在的，出现这种情况的原因是酶联抗体直接非特异吸附在酶标板条表面了，或者和包被抗体反应的。关于非特异吸附的问题，具体的情况楼主需要进行单一变量空包对照分析。即按照ELISA的流程，分别把其中反应的一个试剂用稀释液代替，看是否有非特异吸附。如空白，抗原，酶联抗体，显色液；包被抗体，空白,酶联抗体，显色液；包被抗体，抗原,空白，显色液。确认是否信号为非特异性的。 问题2：未结合的抗原被洗掉这个绝对有放入，这也是ELISA定量时要有对照品，制作标准曲线的原因。因为对照品中相同浓度下的抗原中结合的抗原也会被洗掉，具有相同的反应过程，所以不会对定量产生影响。 关于ELISA，建议你多看看文献，如中国药典2015版9012等，知道ELISA定量是否准确的标准 |
6楼2016-12-22 16:36:15
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