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ELISA阴性对照显色问题 已有2人参与
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原理：检测蛋白与结合蛋白能够相互作用结合，结合蛋白带C-FC标签，最后加入FC抗体（带HRP),TMB显色。 检测蛋白：A1-A8，B1-B8(复孔) 阴性对照：A9-A10，B9-B10(复孔) 说明：1-8中结合蛋白浓度依次减半，阴性对照中所加的结合蛋白浓度与A1相同。阴性对照用BSA包板，其他的操作与检测孔一样。 问题：为什么我的阴性对照颜色这么深？我自己感觉我的封闭和洗脱没有问题，BSA没有污染，但就是找不到原因，折腾了一个月了，哪位大神指点一下，感激不尽！！！小弟的金币数很少，全部拿出。感谢！ 具体步骤： 1. 包被：检测蛋白按1ul/ml的浓度包板，条件4℃过夜。 2. 洗涤：PBS清洗3次，每次2min。 3. 封闭：用3% BSA ,室温1h。 4. 洗涤：PBS清洗3次，每次2min。 5. 结合：加入结合蛋白，37℃ 1h。 6. 洗涤：PBST清洗3次，每次2min 7. 杂交：用1%的BSA配制anti-FC抗体（比例1；10000），37℃ 1h。 8. 洗涤：PBST清洗3次，每次2min。 9. 反应：TMB溶液避光37℃15min左右。 10. 终止：1M HCL终止。  QQ.png |
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