| 查看: 5669 | 回复: 6 | |||
[求助]
转化后涂平板不长菌 已有2人参与
|
|
问题：目的片段连接PE2载体后转BL-21感受态细胞后涂板不长菌 本人操作过程： 连接 连接体系:线性化克隆载体：0.5微升 目的片段（1000-1500bp）: 1.5微升 Enzyme Premix: 5微升 纯水 ：3微升 体系配成后，轻轻混匀各组分，至于50度（pcr仪定温）反应15分钟，至于冰上冷却5分钟，存于负20度冰箱 转化:负70度取100微升BL-21感受态细胞至于冰上解冻2分钟，加入连接反应冷却液，轻轻混匀，至于冰上30分钟，42度热激1分30秒，冰水浴2分钟，加入600微升LB培养基，37摄氏度孵育10分钟充分复苏，37度200转每分钟摇45分钟，6000转离心8分钟，（超净工作台）留100微升培养液吸吹混匀涂板，37度培养箱过夜。 谢谢 |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有75人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 转化相关问题-无法转化成功
已经有17人回复
- PET28a 转化后不长菌 换pet32a 需要什么注意事项？
已经有3人回复
- 转化BL21(DE32),涂含氨苄平板，37度培养，菌长的特别少，几个。。。求大神分析原因
已经有16人回复
- 连接载体转化后挑单菌落，菌落pcr扩出条带，但是摇菌摇不起来
已经有5人回复
- 大肠杆菌氨苄平板不长菌
已经有31人回复
- 大肠杆菌培养 质粒提取后困惑
已经有16人回复
- 巴氏醋杆菌电转化
已经有1人回复
- 载体构建转化后长菌落，挑菌活化不长
已经有2人回复
- 转化后涂布，阴性对照培养皿上长有一两个菌落，能否继续在阳性平皿上挑单克隆？
已经有4人回复
- 电击转化各种不长，求助啊~~~
已经有6人回复
- 连接转化不长菌是怎么回事？？？
已经有15人回复
- 对乳酸菌电转化转质粒，转了一个月老是转不进去，求大神们指导！
已经有11人回复
- 急求！GFP载体转化野生型枯草芽孢杆菌以及红霉素浓度
已经有15人回复
- 转化后不长菌落或不表达！
已经有4人回复
- 关于枯草芽孢杆菌转化的问题~
已经有7人回复
- 大肠杆菌基因重组时PKD46高温怎么都消除不了
已经有25人回复
- 【专题】分子克隆实验专题--（五）感受态细胞的选择与使用
已经有15人回复
- 【求助/交流】转化时平板涂布后要放多久?
已经有17人回复
- 电转化注意事项
已经有14人回复
科学小覃
木虫 (正式写手)
- 应助: 43 (小学生)
- 金币: 2426.9
- 散金: 100
- 红花: 8
- 帖子: 725
- 在线: 86.1小时
- 虫号: 3126634
- 注册: 2014-04-10
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
2楼2016-09-26 20:14:24
小冀-
版主 (著名写手)
- 应助: 713 (博后)
- 贵宾: 3.033
- 金币: 11446.9
- 散金: 1055
- 红花: 82
- 帖子: 2509
- 在线: 445.9小时
- 虫号: 1521695
- 注册: 2011-12-03
- 性别: GG
- 专业: 生物信息学
- 管辖: 微生物
3楼2016-09-27 16:49:50
4楼2016-09-28 10:28:29
5楼2016-09-28 10:30:58
科学小覃
木虫 (正式写手)
- 应助: 43 (小学生)
- 金币: 2426.9
- 散金: 100
- 红花: 8
- 帖子: 725
- 在线: 86.1小时
- 虫号: 3126634
- 注册: 2014-04-10
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
6楼2016-09-28 20:06:06
7楼2017-03-05 08:48:26