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转化后涂平板不长菌 已有2人参与
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问题：目的片段连接PE2载体后转BL-21感受态细胞后涂板不长菌 本人操作过程： 连接 连接体系:线性化克隆载体：0.5微升 目的片段（1000-1500bp）: 1.5微升 Enzyme Premix: 5微升 纯水 ：3微升 体系配成后，轻轻混匀各组分，至于50度（pcr仪定温）反应15分钟，至于冰上冷却5分钟，存于负20度冰箱 转化:负70度取100微升BL-21感受态细胞至于冰上解冻2分钟，加入连接反应冷却液，轻轻混匀，至于冰上30分钟，42度热激1分30秒，冰水浴2分钟，加入600微升LB培养基，37摄氏度孵育10分钟充分复苏，37度200转每分钟摇45分钟，6000转离心8分钟，（超净工作台）留100微升培养液吸吹混匀涂板，37度培养箱过夜。 谢谢 |
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