| 查看: 3833 | 回复: 19 | ||
1257851289新虫 (小有名气)
|
[求助]
PCR没有目的条带，引物二聚体很明显 已有1人参与
|
|
|
程序是95℃5min 95℃30s 60℃30s 72℃5min 32个循环 72℃延伸7min，目的条带4200bp，第一次很亮，后来带就不明显了，送原液测序不行，现在带都没了。求助该怎么改进 发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有212人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有7人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- PCR之前一直有目的条带，在重复做的时候突然就没有目的条带了，求助啊！
已经有11人回复
- 紧急求助~PCR产物电泳条带，特别奇怪，LZ好崩溃，，跪求各位提供帮助
已经有9人回复
- PCR产物电泳条带，特别奇怪
已经有2人回复
- PCR目的条带暗，引物二聚体明亮，如何优化？
已经有18人回复
- PCR没有目的条带，杂带多且亮，不确定是不是引物二聚体
已经有1人回复
- 长片段PCR点样孔亮带，目的条带无法扩增
已经有0人回复
- 构建32a载体，转化DH5α，转化BL21，菌液pcr总是没有任何条带，怎么回事
已经有5人回复
- 连接载体转化后挑单菌落，菌落pcr扩出条带，但是摇菌摇不起来
已经有5人回复
- 菌落PCR有目的条带，质粒提取后质量良好，可是质粒PCR却没有目的条带
已经有4人回复
- pcr开始有条带，后来怎样都没条带
已经有8人回复
- pcr目的条带暗，怎么办呢？？
已经有25人回复
- real-time pcr扩400bp的片段，溶解曲线很好，但跑胶没有目的条带，这是为什么啊？
已经有5人回复
- PCR产物鉴定时有目的条带，跑回收胶时却没有目的条带，这是为什么？
已经有15人回复
- 最近RT-PCR能够出来内参，却没有目的条带，请各位高手帮忙
已经有9人回复
- RT-PCR没有出现内参基因的条带和目的条带，请问是什么原因？
已经有11人回复
- 胶回收后再次pcr无目的条带，急，望神人指点。。。
已经有16人回复
- 用pMD-18T simple 双向测序，PCR验证有条带，结果却是空质粒
已经有2人回复
- 【求助/交流】PCR后没有目的条带，有非特异性条带，求解决办法？？
已经有20人回复
【答案】应助回帖
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2016-08-12 22:32:55
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2016-08-12 22:32:55
|
您好！PCR的问题向来号称最简单也最复杂。您这种情况，从您“第一次很亮”的描述来看，引物是匹配的，条件是可以的，后面重复实验扩不出来，则有可能是引物降解、模板降解、酶活失效等原因。个人认为模板降解的可能性最大。 但是如果“第一次很亮”是一种赝像，那您就需要仔细排查引物的设计，扩增条件的设定，模板的质量等所有体系因素了。通常的，换引物比较常见；扩增不出来时，降低退火温度到50℃也是可以尝试的；当然，模板的质量还是要讨论的，可以跑下胶，测下浓度什么的。通常酶失活的情况少见，但有条件的话，找一管阳性的酶试试，说不定有帮助呢。 总之，要设计对比实验对各种因素排查，有问题可以再交流。祝好运！ |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
1257851289
2楼2016-07-20 16:58:53
1257851289
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2114
- 帖子: 106
- 在线: 27.5小时
- 虫号: 4154822
- 注册: 2015-10-18
- 性别: GG
- 专业: 作物分子育种
3楼2016-07-20 20:06:19
4楼2016-07-20 20:21:31
1257851289
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2114
- 帖子: 106
- 在线: 27.5小时
- 虫号: 4154822
- 注册: 2015-10-18
- 性别: GG
- 专业: 作物分子育种
5楼2016-07-20 21:40:19
6楼2016-07-20 22:10:45
1257851289
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2114
- 帖子: 106
- 在线: 27.5小时
- 虫号: 4154822
- 注册: 2015-10-18
- 性别: GG
- 专业: 作物分子育种
7楼2016-07-20 22:21:20
8楼2016-07-20 22:30:52
1257851289
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2114
- 帖子: 106
- 在线: 27.5小时
- 虫号: 4154822
- 注册: 2015-10-18
- 性别: GG
- 专业: 作物分子育种
9楼2016-07-20 22:33:08
10楼2016-07-21 03:28:20
