应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR没有目的条带，引物二聚体很明显
51/1返回列表
查看: 3734  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

1257851289

新虫 (小有名气)

[求助] PCR没有目的条带，引物二聚体很明显 已有1人参与

程序是95℃5min     95℃30s   60℃30s    72℃5min   32个循环    72℃延伸7min，目的条带4200bp，第一次很亮，后来带就不明显了，送原液测序不行，现在带都没了。求助该怎么改进

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2016-07-19 17:26:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1257851289

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by MMCCBB at 2016-07-20 22:30:52
好的，记得可以这么分析
...

嗯嗯，谢谢。

发自小木虫Android客户端
回复此楼
9楼2016-07-20 22:33:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 20 个回答

lvshilu

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2016-08-12 22:32:55
您好！PCR的问题向来号称最简单也最复杂。您这种情况，从您“第一次很亮”的描述来看，引物是匹配的，条件是可以的，后面重复实验扩不出来，则有可能是引物降解、模板降解、酶活失效等原因。个人认为模板降解的可能性最大。
但是如果“第一次很亮”是一种赝像，那您就需要仔细排查引物的设计，扩增条件的设定，模板的质量等所有体系因素了。通常的，换引物比较常见；扩增不出来时，降低退火温度到50℃也是可以尝试的；当然，模板的质量还是要讨论的，可以跑下胶，测下浓度什么的。通常酶失活的情况少见，但有条件的话，找一管阳性的酶试试，说不定有帮助呢。
总之，要设计对比实验对各种因素排查，有问题可以再交流。祝好运！
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

1257851289
需要金币
2楼2016-07-20 16:58:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1257851289

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by lvshilu at 2016-07-20 16:58:53
您好！PCR的问题向来号称最简单也最复杂。您这种情况，从您“第一次很亮”的描述来看，引物是匹配的，条件是可以的，后面重复实验扩不出来，则有可能是引物降解、模板降解、酶活失效等原因。个人认为模板降解的可能 ...

嗯嗯。谢谢，我仔细找找原因

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2016-07-20 20:06:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

MMCCBB

新虫 (著名写手)
你选择哪个公司的酶，叫什么？有没有其它PCR仪，可以换个PCR仪试试。

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
4楼2016-07-20 20:21:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 20 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭