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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR没有目的条带，引物二聚体很明显
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fengjunchen

铜虫 (小有名气)
第一次很亮，这个很亮的位置是否正确？若是正确的，且后来再也P不出来了，那么估计是模板降解的锅……
引物和酶没那么容易坏的；若是忘了收起来扔在室温里了，那当我没说。
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11楼2016-07-22 15:27:59
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1257851289

新虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by fengjunchen at 2016-07-22 15:27:59
第一次很亮，这个很亮的位置是否正确？若是正确的，且后来再也P不出来了，那么估计是模板降解的锅……
引物和酶没那么容易坏的；若是忘了收起来扔在室温里了，那当我没说。

应该是模板降解了，用了两份dna，原来的带非常弱，新的带挺亮的

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12楼2016-07-22 15:40:13
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1257851289

新虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by huxiangyu at 2016-07-21 03:28:20
宝生物的这个酶还是挺好的，没问题。发一下你的扩增体系吧，还有引物序列

刚刚扩出了

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13楼2016-07-22 15:41:24
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css910320

银虫 (正式写手)
做PCR不要浪费时间找原因，有时候就是那么诡异，把所以东西换新的再做

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14楼2016-07-23 07:13:27
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houfuyuan

新虫 (小有名气)
你得片段较大，可以用takara的 LA DNA聚合酶。另外你可以把温度降两度试试。程序可以是94℃ for 5min；35 cycle of 95℃ for 30s，58℃ for 40s，72℃ for 1min；72℃ for 10min.如果可以，你可以先按这个程序做个温度梯度PCR来确定最好退货温度
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玉无瑕，青春无华。
15楼2016-07-23 20:08:07
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1257851289

新虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by css910320 at 2016-07-23 07:13:27
做PCR不要浪费时间找原因，有时候就是那么诡异，把所以东西换新的再做

嗯嗯。已经扩出来了

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16楼2016-07-23 22:28:57
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1257851289

新虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by houfuyuan at 2016-07-23 20:08:07
你得片段较大，可以用takara的 LA DNA聚合酶。另外你可以把温度降两度试试。程序可以是94℃ for 5min；35 cycle of 95℃ for 30s，58℃ for 40s，72℃ for 1min；72℃ for 10min.如果可以，你可以先按这个程序做个温 ...

用的就是这个酶。昨天又试了试扩出来。

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17楼2016-07-23 22:29:40
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houfuyuan

新虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by houfuyuan at 2016-07-23 20:08:07
你得片段较大，可以用takara的 LA DNA聚合酶。另外你可以把温度降两度试试。程序可以是94℃ for 5min；35 cycle of 95℃ for 30s，58℃ for 40s，72℃ for 1min；72℃ for 10min.如果可以，你可以先按这个程序做个温 ...

这个程序写错了，应该是94℃ for 5min；35 cycle of 95℃ for 30s，58℃ for 40s，72℃ for 2min；72℃ for 10min
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玉无瑕，青春无华。
18楼2016-07-24 18:36:38
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tjabhm


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19楼2016-08-01 09:46:53
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wbhnan

新虫 (初入文坛)
首先测一下引物和样品浓度，样品浓度要求不是特别高，引物浓度在10 umol/L，程序的话退火温度做个梯度，每个0.5度试一下，还不行扩增配方发一下看看在改改
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20楼2016-08-12 18:18:08
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