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wenyi2015银虫 (正式写手)
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重组蛋白 离子交换 已有7人参与
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各位亲 本人纯化小白 最近做离子交换 目的蛋白大肠杆菌表达 pi 6.5 （网上计算值）使用20mm tris8.0 缓冲液上Q柱 目的蛋白几乎都流穿 目前可以过载 请给位帮助分析原因 发自小木虫IOS客户端 |
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chlorella409
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4楼2016-06-30 09:59:48
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| 蛋白都流穿了，原因主要是缓冲液pH，超声功率（前提是包涵体哈），标签丢失，未暴露等原因，详细解决方案可见：蛋白纯化常见问题分析解决：http://www.detaibio.com/topics/qin-he-chun-hua-faq.html |
6楼2016-07-01 18:06:30
8楼2016-07-02 19:00:53
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1不是这种变化影响蛋白挂柱的。pH的变化可能是温度变化引起的，而且正常缓冲液配了保存pH都会变化的。还有，看介质说明书上有没有说这种缓冲体系的离子和介质发生相互作用呢。2算过收率吗？不跑电泳问怎么确定穿透有你的蛋白呢。3挂不上就优化条件嘛。如pH 发自小木虫Android客户端 |
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9楼2016-07-03 08:01:01
hc-material
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2楼2016-06-29 17:56:53
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5楼2016-06-30 15:17:05
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7楼2016-07-02 09:03:48
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送红花一朵 |
多谢指导 我的确没有跑胶 用的是elisa检查目标蛋白 流穿组分活性很高 梯度洗脱各个组分400mm nacl浓度洗脱有较弱活性 其他都无活性 柱体积15-20ml 上样体积10ml 蛋白浓度<1mg /ml 发自小木虫IOS客户端 |
10楼2016-07-04 08:21:21