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yinxiang_1

铜虫 (初入文坛)

[求助] DEAE纯化重组蛋白无法完全洗脱下来。

我的重组蛋白吧，先过的Ni-NTA粗纯化，然后复性。上的DEAE离子交换柱，每次上样穿出液A280都有一个很高的吸收峰，SDS-PAGE检测不到。后来发现有一部分目的蛋白在柱子上下不来，导致DEAE后纯度反而变低。
尝试用过1M NaoH，NaAc，2MNacl都无法把蛋白洗脱下（我们挖了一部分胶跑的SDS-PAGE）
请问这是为什么，有什么方法可以把蛋白洗脱下来么，我蛋白等电点是4.7.上样buffer pH7.4,6.5都试过。
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1楼 2012-04-13 07:57:54
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