24小时热门版块排行榜    

查看: 5860  |  回复: 10

12一笑而过

金虫 (小有名气)

[求助] 如何鉴定蛋白质的纯度 已有3人参与

前段时间一直在做蛋白质的分离纯化,蛋白是重组乙酰胆碱酯酶,分子量大概为70kDa。采用的是强阴离子交换法纯化的,纯化后电泳呈单条带,后将样品送去南京一家生物公司进行具体的纯度鉴定,采用的方法是高效液相色谱。现得到液相图谱,本人没做过液相,看不懂结果也没办法分析,还请各位大神帮我分析分析。具体图谱如附件,在此先谢谢各位大神了~~~~~~~~~~~~~PS:个人感觉这物质峰是不是没有完全分离开呀?还有拿到这样的结果纯度该怎样计算?
回复此楼

» 本帖附件资源列表

  • 欢迎监督和反馈:小木虫仅提供交流平台,不对该内容负责。
    本内容由用户自主发布,如果其内容涉及到知识产权问题,其责任在于用户本人,如对版权有异议,请联系邮箱:xiaomuchong@tal.com
  • 附件 1 : 30%B-005-1.pdf
  • 2014-12-10 20:37:28, 78.05 K

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

科研之路很艰辛,但我会坚强的走下去的!给自己加油!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

皇猪

木虫 (正式写手)

你为什么不用重组乙酰胆碱酯酶标品做一个HPLC图呢,这样一对比就知道哪些峰是杂峰,哪些是重组乙酰胆碱酯酶的峰了
没有梦想,那跟咸鱼有什么分别
3楼2014-12-11 09:38:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

皇猪

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
12一笑而过: 金币+20, ★★★很有帮助 2014-12-13 10:15:14
蛋白不纯,有杂峰出现。另外,我对你的重组乙酰胆碱酯酶的分子结构不了解,所以不确定HPLC峰图中是不是有重组乙酰胆碱酯酶降解而引起杂峰的存在。你的重组乙酰胆碱酯酶大概在13-15min间被检测出来.这个公司用的PMP1 溶剂B无法检测你的重组乙酰胆碱酯酶。对了,他们公司用的是什么柱子做HPLC检测的???怎么峰图中没有标出呀???

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

没有梦想,那跟咸鱼有什么分别
2楼2014-12-11 09:10:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

皇猪

木虫 (正式写手)

你没做个标品图,纯度多少应该很难算吧,建议先做个标品的HPLC,这样好比对计算些。。
没有梦想,那跟咸鱼有什么分别
4楼2014-12-11 09:41:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

12一笑而过

金虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 皇猪 at 2014-12-11 09:10:05
蛋白不纯,有杂峰出现。另外,我对你的重组乙酰胆碱酯酶的分子结构不了解,所以不确定HPLC峰图中是不是有重组乙酰胆碱酯酶降解而引起杂峰的存在。你的重组乙酰胆碱酯酶大概在13-15min间被检测出来.这个公司用的PMP1 ...

非常感谢您的回复。重组乙酰胆碱酯酶没有标品所以没有跑标品,公司用的柱子是Zorbax SB-C18  4.6 X 250  5 um  (Agilent .USA)。连空白都木有跑的,根本不清楚哪些是溶剂峰。觉得被公司坑了,报告结果就这么一张图谱,压根就没办法说明蛋白纯度。你所说的“这个公司用的PMP1 溶剂B无法检测你的重组乙酰胆碱酯酶。”这句话我该如何理解?
科研之路很艰辛,但我会坚强的走下去的!给自己加油!
5楼2014-12-13 10:13:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

静待一片天yu

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
12一笑而过: 金币+2, ★有帮助 2014-12-19 22:07:17
可以尝试下sds-page法,然后运用软件算纯度.祝好运!
6楼2014-12-14 22:47:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

12一笑而过

金虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 静待一片天yu at 2014-12-14 22:47:41
可以尝试下sds-page法,然后运用软件算纯度.祝好运!

做过SDS-PAGE的,电泳呈单条带,才送去公司做具体的纯度鉴定的。电泳有一些浓度很低的杂蛋白是跑不出条带的,所以计算出来的纯度肯定是不准确的,我接下来的实验对蛋白纯度要求很高,所以要准确知道蛋白纯度,所以才送去公司鉴定的,不想到结果这样。
科研之路很艰辛,但我会坚强的走下去的!给自己加油!
7楼2014-12-15 10:07:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lifelovewei

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
12一笑而过: 金币+2, ★有帮助 2014-12-19 22:07:42
可是这个这么杂 怎么可能是纯品?我们做的重组没有过这么多峰型的70K 用c4 差不多,c18很容易堵
8楼2014-12-15 10:18:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

12一笑而过

金虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by lifelovewei at 2014-12-15 10:18:10
可是这个这么杂 怎么可能是纯品?我们做的重组没有过这么多峰型的70K 用c4 差不多,c18很容易堵

我有跟公司讲过分子量比较大,要他们用C4或C8柱做纯度分析,但是他们还是用了C18柱,不知道为啥分析出来的结果会这样,即便我的蛋白纯度不是很高,但最起码电泳已经是单一条带了,也不可能这么杂的,不知道公司是怎么搞的。
科研之路很艰辛,但我会坚强的走下去的!给自己加油!
9楼2014-12-19 22:06:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

超级219

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 12一笑而过 at 2014-12-15 10:07:42
做过SDS-PAGE的,电泳呈单条带,才送去公司做具体的纯度鉴定的。电泳有一些浓度很低的杂蛋白是跑不出条带的,所以计算出来的纯度肯定是不准确的,我接下来的实验对蛋白纯度要求很高,所以要准确知道蛋白纯度,所以 ...

同学你好,想问下,SDS-PAGE条带跑出来后,怎么计算纯度啊,多谢。
10楼2016-01-10 17:45:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 12一笑而过 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 3/150 2026-11-10 01:40 by FChKX8meu1ds
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 4/200 2026-11-10 01:29 by FChKX8meu1ds
[考博] 27博士申请 +3 白白白ly 2026-11-09 3/150 2026-11-09 21:39 by szq0819
[文学芳草园] 厉娜 +3 张丹枫1991 2026-11-09 5/250 2026-11-09 16:53 by 张丹枫1991
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 12/600 2026-11-09 13:26 by Equinoxhua
[考研] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 15/750 2026-11-09 13:19 by Equinoxhua
[考研] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +6 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 14/700 2026-11-09 11:52 by GwrQVVR6Oenx
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 16/800 2026-11-09 11:47 by GwrQVVR6Oenx
[考博] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 15/750 2026-11-09 11:41 by GwrQVVR6Oenx
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 10/500 2026-11-09 08:00 by IhnEQauGmT3K
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 12/600 2026-11-09 06:32 by l48hFd8Nwae2
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 8/400 2026-11-08 23:01 by l48hFd8Nwae2
[教师之家] 延安大学回应“副教授留绝笔信”:确已离世,正核实举报内容 +3 yexuqing 2026-11-04 5/250 2026-11-07 13:22 by 苏东坡二世
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 11/550 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 12/600 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 kvewwGtKktqB 2026-11-04 16/800 2026-11-06 05:00 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 7/350 2026-11-06 02:13 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 02:04 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 hNpp4Y2CGvSC 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:53 by qL1cU46YIdK0
信息提示
请填处理意见