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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 如何鉴定蛋白质的纯度
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12一笑而过

金虫 (小有名气)

[求助] 如何鉴定蛋白质的纯度已有3人参与

前段时间一直在做蛋白质的分离纯化，蛋白是重组乙酰胆碱酯酶，分子量大概为70kDa。采用的是强阴离子交换法纯化的，纯化后电泳呈单条带，后将样品送去南京一家生物公司进行具体的纯度鉴定，采用的方法是高效液相色谱。现得到液相图谱，本人没做过液相，看不懂结果也没办法分析，还请各位大神帮我分析分析。具体图谱如附件，在此先谢谢各位大神了~~~~~~~~~~~~~PS：个人感觉这物质峰是不是没有完全分离开呀？还有拿到这样的结果纯度该怎样计算？
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科研之路很艰辛，但我会坚强的走下去的！给自己加油！
1楼2014-12-10 20:37:41
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12一笑而过

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by lifelovewei at 2014-12-15 10:18:10
可是这个这么杂 怎么可能是纯品？我们做的重组没有过这么多峰型的70K 用c4 差不多，c18很容易堵

我有跟公司讲过分子量比较大，要他们用C4或C8柱做纯度分析，但是他们还是用了C18柱，不知道为啥分析出来的结果会这样，即便我的蛋白纯度不是很高，但最起码电泳已经是单一条带了，也不可能这么杂的，不知道公司是怎么搞的。
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科研之路很艰辛，但我会坚强的走下去的！给自己加油！
9楼2014-12-19 22:06:44
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皇猪

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
12一笑而过: 金币+20, ★★★很有帮助 2014-12-13 10:15:14
蛋白不纯，有杂峰出现。另外，我对你的重组乙酰胆碱酯酶的分子结构不了解，所以不确定HPLC峰图中是不是有重组乙酰胆碱酯酶降解而引起杂峰的存在。你的重组乙酰胆碱酯酶大概在13-15min间被检测出来.这个公司用的PMP1 溶剂B无法检测你的重组乙酰胆碱酯酶。对了，他们公司用的是什么柱子做HPLC检测的？？？怎么峰图中没有标出呀？？？
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12一笑而过
没有梦想，那跟咸鱼有什么分别
2楼2014-12-11 09:10:05
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皇猪

木虫 (正式写手)
你为什么不用重组乙酰胆碱酯酶标品做一个HPLC图呢，这样一对比就知道哪些峰是杂峰，哪些是重组乙酰胆碱酯酶的峰了
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没有梦想，那跟咸鱼有什么分别
3楼2014-12-11 09:38:33
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皇猪

木虫 (正式写手)
你没做个标品图，纯度多少应该很难算吧，建议先做个标品的HPLC，这样好比对计算些。。
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没有梦想，那跟咸鱼有什么分别
4楼2014-12-11 09:41:41
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