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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 如何检测抽提线粒体的纯度，即不包含胞质蛋白的污染？
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hellolin

金虫 (小有名气)

[求助] 如何检测抽提线粒体的纯度，即不包含胞质蛋白的污染？

如题
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scienceguy
1楼 2013-03-21 20:53:51
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crystalfrog

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-03-22 00:19:17
可以砸胞浆蛋白的marker 在我们实验室中常用的是AR: aldose reductase
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2楼2013-03-21 22:58:02
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当下的距离

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以砸胞浆蛋白的marker 在我们实验室中常用的是AR: aldose reductase
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youcangetwhatyouwantifyouwantitenough.
3楼2013-03-22 00:40:46
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hellolin

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by crystalfrog at 2013-03-21 22:58:02
可以砸胞浆蛋白的marker 在我们实验室中常用的是AR: aldose reductase

你好，你说的是做 aldose reductase的western呢还是怎么检测，能否具体点？谢谢
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scienceguy
4楼2013-03-23 21:20:06
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crystalfrog

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
hellolin: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2013-03-24 09:52:58
引用回帖:
4楼: Originally posted by hellolin at 2013-03-23 21:20:06
你好，你说的是做 aldose reductase的western呢还是怎么检测，能否具体点？谢谢...

是 你最终得到的样品可能有三份 一份是全细胞裂解液 一份是“线粒体” 一份是除过线粒体剩下的 将这三份样品loading 上样跑胶，砸Western看Aldose Reductase (AR)的情况。同时你还需要砸一个ATP synthase subunit beta，这是线粒体的marker。理想条件下，AR应该是在线粒体中很少，WCL中中等，其余部分应该含量较高，而ATP synthase 则是在线粒体中很多 WCL中中等，其余部分含量很少
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5楼2013-03-23 21:59:21
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hellolin

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by crystalfrog at 2013-03-23 21:59:21
是 你最终得到的样品可能有三份 一份是全细胞裂解液 一份是“线粒体” 一份是除过线粒体剩下的 将这三份样品loading 上样跑胶，砸Western看Aldose Reductase (AR)的情况。同时你还需要砸一个ATP synthase subunit  ...

也就是说不管怎么弄，其实线粒体中还是会有残留部分胞质蛋白的是吧。。我看到有一些用actin做的，在胞质蛋白中多，线粒体中很少，不知道可否？
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scienceguy
6楼2013-03-23 23:04:20
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crystalfrog

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by hellolin at 2013-03-23 23:04:20
也就是说不管怎么弄，其实线粒体中还是会有残留部分胞质蛋白的是吧。。我看到有一些用actin做的，在胞质蛋白中多，线粒体中很少，不知道可否？...

应该可以 actin属于细胞骨架蛋白 线粒体里面suppose是没有的
是的 其实提线粒体就是相对富集嘛 当然这也取决于你的实验目的是啥
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hellolin
7楼2013-03-24 09:50:31
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hellolin

金虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by crystalfrog at 2013-03-24 09:50:31
应该可以 actin属于细胞骨架蛋白 线粒体里面suppose是没有的
是的 其实提线粒体就是相对富集嘛 当然这也取决于你的实验目的是啥...

好的，谢谢啦
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scienceguy
8楼2013-03-24 09:54:41
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