24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 1833  |  回复: 7

hellolin

金虫 (小有名气)

[求助] 如何检测抽提线粒体的纯度,即不包含胞质蛋白的污染?

如题
回复此楼
scienceguy
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

crystalfrog

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励应助! 2013-03-22 00:19:17
可以砸胞浆蛋白的marker 在我们实验室中常用的是AR: aldose reductase
2楼2013-03-21 22:58:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

当下的距离

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以砸胞浆蛋白的marker 在我们实验室中常用的是AR: aldose reductase
youcangetwhatyouwantifyouwantitenough.
3楼2013-03-22 00:40:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hellolin

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by crystalfrog at 2013-03-21 22:58:02
可以砸胞浆蛋白的marker 在我们实验室中常用的是AR: aldose reductase

你好,你说的是做 aldose reductase的western呢还是怎么检测,能否具体点?谢谢
scienceguy
4楼2013-03-23 21:20:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

crystalfrog

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
hellolin: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2013-03-24 09:52:58
引用回帖:
4楼: Originally posted by hellolin at 2013-03-23 21:20:06
你好,你说的是做 aldose reductase的western呢还是怎么检测,能否具体点?谢谢...

是 你最终得到的样品可能有三份 一份是全细胞裂解液 一份是“线粒体” 一份是除过线粒体剩下的 将这三份样品loading 上样跑胶,砸Western看Aldose Reductase (AR)的情况。同时你还需要砸一个ATP synthase subunit beta,这是线粒体的marker。理想条件下,AR应该是在线粒体中很少,WCL中中等,其余部分应该含量较高,而ATP synthase 则是在线粒体中很多 WCL中中等,其余部分含量很少
5楼2013-03-23 21:59:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hellolin

金虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by crystalfrog at 2013-03-23 21:59:21
是 你最终得到的样品可能有三份 一份是全细胞裂解液 一份是“线粒体” 一份是除过线粒体剩下的 将这三份样品loading 上样跑胶,砸Western看Aldose Reductase (AR)的情况。同时你还需要砸一个ATP synthase subunit  ...

也就是说不管怎么弄,其实线粒体中还是会有残留部分胞质蛋白的是吧。。我看到有一些用actin做的,在胞质蛋白中多,线粒体中很少,不知道可否?
scienceguy
6楼2013-03-23 23:04:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

crystalfrog

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by hellolin at 2013-03-23 23:04:20
也就是说不管怎么弄,其实线粒体中还是会有残留部分胞质蛋白的是吧。。我看到有一些用actin做的,在胞质蛋白中多,线粒体中很少,不知道可否?...

应该可以 actin属于细胞骨架蛋白 线粒体里面suppose是没有的
是的 其实提线粒体就是相对富集嘛 当然这也取决于你的实验目的是啥

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

7楼2013-03-24 09:50:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hellolin

金虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by crystalfrog at 2013-03-24 09:50:31
应该可以 actin属于细胞骨架蛋白 线粒体里面suppose是没有的
是的 其实提线粒体就是相对富集嘛 当然这也取决于你的实验目的是啥...

好的,谢谢啦
scienceguy
8楼2013-03-24 09:54:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 hellolin 的主题更新
信息提示
请填处理意见