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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 重组蛋白 离子交换
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wenyi2015

银虫 (正式写手)

[交流] 重组蛋白 离子交换 已有7人参与

各位亲 本人纯化小白 最近做离子交换 目的蛋白大肠杆菌表达 pi 6.5 （网上计算值）使用20mm tris8.0 缓冲液上Q柱 目的蛋白几乎都流穿 目前可以过载 请给位帮助分析原因

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1楼 2016-06-29 17:44:37
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chlorella409

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
Q柱不行换S柱，蛋白表面电荷不是完全由缓冲决定的。
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4楼2016-06-30 09:59:48
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hc-material

专家顾问 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
柱子没平衡好。上样速度太快，上电泳图。

离子交换层析过程中，蛋白和柱子的结合取决于局部电荷，不是净电荷，所以与pI有关，但不完全取决于pI。可以在现在的缓冲液情况下换DEAE的试试。DEAE的还不吸附，就可以换阳离子的。
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2楼2016-06-29 17:56:53
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wenyi2015

银虫 (正式写手)
15ml柱子 上样流速1.0ml/min 电泳没跑 直接检测活性了……

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3楼2016-06-29 17:58:36
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wenyi2015

银虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by chlorella409 at 2016-06-30 09:59:48
Q柱不行换S柱，蛋白表面电荷不是完全由缓冲决定的。

谢谢指导 还想请问一下 在这个实验过程中 上样后ph由8.3降到8.15 这个波动对目的蛋白与柱子的结合是否会有较大影响

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5楼2016-06-30 15:17:05
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