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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 重组蛋白 离子交换
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wenyi2015

银虫 (正式写手)

[交流] 重组蛋白 离子交换 已有7人参与

各位亲 本人纯化小白 最近做离子交换 目的蛋白大肠杆菌表达 pi 6.5 （网上计算值）使用20mm tris8.0 缓冲液上Q柱 目的蛋白几乎都流穿 目前可以过载 请给位帮助分析原因

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1楼 2016-06-29 17:44:37
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木槿飘扬

新虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
7楼: Originally posted by wenyi2015 at 2016-07-02 09:03:48
亲 我的蛋白是可溶性表达 上Q柱 上样前ph8.3 上样时降低到8.15 不知道这个降低会不会导致目的蛋白挂不上柱子
...

1不是这种变化影响蛋白挂柱的。pH的变化可能是温度变化引起的，而且正常缓冲液配了保存pH都会变化的。还有，看介质说明书上有没有说这种缓冲体系的离子和介质发生相互作用呢。2算过收率吗？不跑电泳问怎么确定穿透有你的蛋白呢。3挂不上就优化条件嘛。如pH

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wenyi2015
9楼2016-07-03 08:01:01
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hc-material

专家顾问 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
柱子没平衡好。上样速度太快，上电泳图。

离子交换层析过程中，蛋白和柱子的结合取决于局部电荷，不是净电荷，所以与pI有关，但不完全取决于pI。可以在现在的缓冲液情况下换DEAE的试试。DEAE的还不吸附，就可以换阳离子的。
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2楼2016-06-29 17:56:53
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wenyi2015

银虫 (正式写手)
15ml柱子 上样流速1.0ml/min 电泳没跑 直接检测活性了……

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3楼2016-06-29 17:58:36
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chlorella409

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
Q柱不行换S柱，蛋白表面电荷不是完全由缓冲决定的。
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4楼2016-06-30 09:59:48
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