24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1471  |  回复: 14
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

wenyi2015

银虫 (正式写手)

[交流] 重组蛋白 离子交换 已有7人参与

各位亲 本人纯化小白 最近做离子交换 目的蛋白大肠杆菌表达 pi 6.5 (网上计算值)使用20mm tris8.0 缓冲液上Q柱 目的蛋白几乎都流穿 目前可以过载 请给位帮助分析原因

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wenyi2015

银虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
9楼: Originally posted by 木槿飘扬 at 2016-07-03 08:01:01
1不是这种变化影响蛋白挂柱的。pH的变化可能是温度变化引起的,而且正常缓冲液配了保存pH都会变化的。还有,看介质说明书上有没有说这种缓冲体系的离子和介质发生相互作用呢。2算过收率吗?不跑电泳问怎么确定穿透 ...

多谢指导 我的确没有跑胶 用的是elisa检查目标蛋白 流穿组分活性很高 梯度洗脱各个组分400mm nacl浓度洗脱有较弱活性 其他都无活性 柱体积15-20ml 上样体积10ml 蛋白浓度<1mg
/ml

发自小木虫IOS客户端
10楼2016-07-04 08:21:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

hc-material

专家顾问 (职业作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
柱子没平衡好。上样速度太快,上电泳图。

离子交换层析过程中,蛋白和柱子的结合取决于局部电荷,不是净电荷,所以与pI有关,但不完全取决于pI。可以在现在的缓冲液情况下换DEAE的试试。DEAE的还不吸附,就可以换阳离子的。
2楼2016-06-29 17:56:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wenyi2015

银虫 (正式写手)

15ml柱子 上样流速1.0ml/min 电泳没跑 直接检测活性了……

发自小木虫IOS客户端
3楼2016-06-29 17:58:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chlorella409

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
Q柱不行换S柱,蛋白表面电荷不是完全由缓冲决定的。
4楼2016-06-30 09:59:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085602 化工专硕 338分 求调剂 +9 路痴小琪 2026-03-27 9/450 2026-03-28 01:11 by 飞行日记西
[考研] 材料求调剂一志愿哈工大324 +3 闫旭东 2026-03-28 4/200 2026-03-28 00:51 by JourneyLucky
[考研] 085701环境工程求调剂 +8 多久上课 2026-03-27 8/400 2026-03-27 22:21 by 无际的草原
[考研] 285求调剂 +4 AZMK 2026-03-27 7/350 2026-03-27 20:59 by AZMK
[考研] 291求调剂 +6 孅華 2026-03-22 6/300 2026-03-27 19:56 by WYUMater
[考研] 一志愿上海理工能源动力(085800)310分求调剂 +3 zhangmingc 2026-03-27 4/200 2026-03-27 19:01 by 给你你注意休息
[考研] 求调剂 +4 零八# 2026-03-27 4/200 2026-03-27 18:07 by yu221
[考研] 07化学280分求调剂 +10 722865 2026-03-23 10/500 2026-03-27 15:51 by Plutoqq
[考研] 308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-25 7/350 2026-03-27 14:47 by 狂炫麦当当
[考研] 334求调剂 +3 雨清天晴 2026-03-21 3/150 2026-03-27 11:30 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿郑大085600,310分求调剂 +5 李潇可 2026-03-26 5/250 2026-03-27 11:14 by 不吃魚的貓
[考研] 材料学硕,求调剂 6+5 糖葫芦888ll 2026-03-22 10/500 2026-03-27 08:18 by hypershenger
[考研] 286求调剂 +13 Faune 2026-03-21 13/650 2026-03-26 19:52 by peike
[考研] 生物学 296 求调剂 +4 朵朵- 2026-03-26 6/300 2026-03-26 19:01 by 不吃魚的貓
[考研] 考研调剂 +6 来好运来来来 2026-03-21 7/350 2026-03-25 22:43 by 418490947
[考研] 318求调剂 +3 plum李子 2026-03-23 3/150 2026-03-25 09:42 by 雾散后相遇lc
[考研] 材料专硕找调剂 +5 哈哈哈吼吼吼哈 2026-03-23 5/250 2026-03-24 19:07 by 了了了了。。
[考研] 一志愿东华大学化学070300,求调剂 +7 2117205181 2026-03-21 8/400 2026-03-22 22:55 by chixmc
[考研] 275求调剂 +6 shansx 2026-03-22 8/400 2026-03-22 15:27 by barlinike
[考研] 求调剂 +5 Zhangbod 2026-03-21 7/350 2026-03-22 13:13 by Zhangbod
信息提示
请填处理意见