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wenyi2015

银虫 (正式写手)

[交流] 重组蛋白 离子交换 已有7人参与

各位亲 本人纯化小白 最近做离子交换 目的蛋白大肠杆菌表达 pi 6.5 (网上计算值)使用20mm tris8.0 缓冲液上Q柱 目的蛋白几乎都流穿 目前可以过载 请给位帮助分析原因

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wenyi2015

银虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by wochong at 2016-07-01 18:06:30
蛋白都流穿了,原因主要是缓冲液pH,超声功率(前提是包涵体哈),标签丢失,未暴露等原因,详细解决方案可见:蛋白纯化常见问题分析解决:http://www.detaibio.com/topics/qin-he-chun-hua-faq.html...

亲 我的蛋白是可溶性表达 上Q柱 上样前ph8.3 上样时降低到8.15 不知道这个降低会不会导致目的蛋白挂不上柱子

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7楼2016-07-02 09:03:48
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hc-material

专家顾问 (职业作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
柱子没平衡好。上样速度太快,上电泳图。

离子交换层析过程中,蛋白和柱子的结合取决于局部电荷,不是净电荷,所以与pI有关,但不完全取决于pI。可以在现在的缓冲液情况下换DEAE的试试。DEAE的还不吸附,就可以换阳离子的。
2楼2016-06-29 17:56:53
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wenyi2015

银虫 (正式写手)

15ml柱子 上样流速1.0ml/min 电泳没跑 直接检测活性了……

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3楼2016-06-29 17:58:36
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chlorella409

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
Q柱不行换S柱,蛋白表面电荷不是完全由缓冲决定的。
4楼2016-06-30 09:59:48
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