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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 酵母重组子筛选
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粒粒分明

新虫 (初入文坛)

[求助] 酵母重组子筛选 已有1人参与

我的菌株是X-33，质粒是PPICZaA，构建好的重组质粒转化后长出好多菌落，现在博莱霉素的浓度是100ug/ml ，我该怎样筛选，有的朋友说转移到高浓度的博莱霉素板子，请问我该怎样处理？急！麻烦知道的虫友指点一下，谢啦

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1楼 2016-05-16 18:45:00
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brown-eyes

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
粒粒分明(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰·手有余香，谢谢你的理解与支持。祝您科研顺利，文章多多。 2016-06-03 23:01:27
1.首先你可以直接做诱导小试，因为拷贝数高不一定表达量高
2.在小试的同时，配制高浓度的平板，做个梯度比如0.5mg/ml，1mg/ml，2mg/ml,然后将你的克隆点种在平板上，筛选出高拷贝的克隆，再进行小试。
这样你在两周内就可以做完你的表达实验
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粒粒分明
3楼2016-06-03 17:11:53
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粒粒分明

新虫 (初入文坛)
这是我的平板
酵母重组子筛选



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2楼2016-05-16 18:47:40
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粒粒分明

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by brown-eyes at 2016-06-03 17:11:53
1.首先你可以直接做诱导小试，因为拷贝数高不一定表达量高
2.在小试的同时，配制高浓度的平板，做个梯度比如0.5mg/ml，1mg/ml，2mg/ml,然后将你的克隆点种在平板上，筛选出高拷贝的克隆，再进行小试。
这样你在两 ...

请问将克隆点种在高浓度上具体是怎么操作，洗下来再涂板吗？

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4楼2016-06-04 20:14:01
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tbsjxy

铜虫 (小有名气)
看你的平板长出的可能就是单克隆啊，不放心的话，可以按楼上讲的，提高下抗素浓度，再涂一遍
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该用户由于违规已被禁言一辈子
5楼2016-06-04 20:52:50
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