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junmove铜虫 (小有名气)
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毕赤酵母表达酶发酵无活性
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欢迎高手解疑答惑： 本人将一个淀粉酶基因克隆到pPICZαA载体上的多克隆位点内，Sac I 线性化电转后用博莱霉素梯度（100-200ug/ml）的YPD板子筛选阳性转化子，并将几十个转化子全部拿来发酵后检测发酵液活性，在两株菌的发酵液中检测到了较高的淀粉酶活性，将这两株菌保存于甘油管中置冰箱保存。然后将保存的菌活化、发酵，相同的发酵条件，却在发酵液中再也检测不到淀粉酶的活性。做了两次转化，每次都通过转化子发酵检测活性的方法筛选到了重组酵母菌，但用保存的菌再去发酵，就检测不到活性了。哪位高手可以指点一二，为什么保菌后再发酵就无活性了？ 正常培养用的YPD, 表达培养基用的BMMY, 0.5%甲醇诱导表达。发酵用的是 50ml 离心管，发酵体积5ml。 [ Last edited by junmove on 2014-2-19 at 21:08 ] |
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