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脑袋空空

木虫 (小有名气)

[求助] 菌饼有活性,发酵液无活性,很纠结,求大神指点

我现在做一种菌,前期有人做过,也分离到东西,现在出现很纠结的问题,求指点,详细如下:

1.发酵液用牛津杯法测活性,结果无活性
2.用同样的平板中的菌饼,直接做平板对峙,显示有活性,而且很高
3.这个菌原来本实验室做过,也是发酵液有活性,而且还分离到东西
4.实验将各相,乙酸乙酯相、正丁醇相、还有剩余的水相,都做了检测,没有抑菌圈……


以上三点就是我实验中矛盾的地方,我想的可能的问题就是【发酵过程】、【萃取过程】、【发酵液的放置(时间、温度等)】方面有问题,很不理解到底哪里出了有问题,求高手指点,实验进行不下去了呢……~~~~(>_<~~~~

补充:又用杯碟法对上述几个相进行重新活性检测,还没有到时间;又进行重新发酵,想着重新再试一下,这些方面也求指点,有什么建议尽量提,大神,拜托啦……
菌饼有活性,发酵液无活性,很纠结,求大神指点
菌饼平板对峙.JPG
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兰鑫
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wanglei512

金虫 (正式写手)

不是没活性,是活性很低,水解圈的大小不能反映酶活性的大小,况且你的菌落应该长了好几天了
7楼2013-07-08 15:25:55
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wanglei512

金虫 (正式写手)

还有你的酶是胞外的还是胞内的,这个也很重要,如果是胞内的,在培养基中分泌的应该很少
8楼2013-07-08 15:29:34
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普通回帖

脑袋空空

木虫 (小有名气)

拜托各位大神,金币就那么点了,全给了……
兰鑫
2楼2013-07-05 16:26:51
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mada1986

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
放线菌吧?你不把发酵过程详细说一下,真没办法分析
3楼2013-07-05 20:39:56
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tangmincui

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我 最近的菌是试管摇菌有活性,三角瓶活性就不好,我猜测是,菌是好氧的。不知道你得是不是,也是好氧型的。但是怎么解决问题。。。正在进行中
4楼2013-07-06 22:13:28
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脑袋空空

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by mada1986 at 2013-07-05 20:39:56
放线菌吧?你不把发酵过程详细说一下,真没办法分析

是放线菌,我的发酵过程比较一般,就是:配置好黄豆粉培养基——分装灭菌——超净台接菌饼——封口——放摇床
别的没什么差别……求指点……
兰鑫
5楼2013-07-08 09:41:30
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mada1986

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 脑袋空空 at 2013-07-08 09:41:30
是放线菌,我的发酵过程比较一般,就是:配置好黄豆粉培养基——分装灭菌——超净台接菌饼——封口——放摇床
别的没什么差别……求指点……...

看样子你的发酵过程只是一步发酵,这个没有活性是正常的。放线菌一般要二次发酵活性才能表现出来,应该是先用种子培养基培养种子液,再把种子液接种到发酵培养基里面。种子液的接种量在2%到5%之间,如果一次发酵的话,菌种会大量繁殖,长得很快,代谢产物产生的很少,同时也会被死亡的菌体释放的酶类分解。另外种子培养基的组成和发酵培养基不同,种子的营养比较丰富,而发酵培养基的一般比较贫乏。这样才能促进次级代谢产物的积累。
6楼2013-07-08 12:08:20
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脑袋空空

木虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by mada1986 at 2013-07-08 12:08:20
看样子你的发酵过程只是一步发酵,这个没有活性是正常的。放线菌一般要二次发酵活性才能表现出来,应该是先用种子培养基培养种子液,再把种子液接种到发酵培养基里面。种子液的接种量在2%到5%之间,如果一次发酵的 ...

嗯啊,这个很有可能,我跟师姐做她的那个放线菌的时候是二次发酵~~不过,我们实验室的老师原来做这个菌的,当时也是打菌饼,发酵液也是有活性的,可是到我这就不行了……我试试二次发酵……还有别的可能不?我也再尝试下……谢谢啊,亲人啊……
兰鑫
9楼2013-07-09 14:30:18
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脑袋空空

木虫 (小有名气)

昨天,??新活性检测的结果出???了,表示没有活性,??是??作问题……现在正在?????新???酵的活性检测……等结果……
兰鑫
10楼2013-07-09 14:33:20
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