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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 菌饼有活性，发酵液无活性，很纠结，求大神指点
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脑袋空空

木虫 (小有名气)

[求助] 菌饼有活性，发酵液无活性，很纠结，求大神指点

我现在做一种菌，前期有人做过，也分离到东西，现在出现很纠结的问题，求指点，详细如下：

1.发酵液用牛津杯法测活性，结果无活性
2.用同样的平板中的菌饼，直接做平板对峙，显示有活性，而且很高
3.这个菌原来本实验室做过，也是发酵液有活性，而且还分离到东西
4.实验将各相，乙酸乙酯相、正丁醇相、还有剩余的水相，都做了检测，没有抑菌圈……


以上三点就是我实验中矛盾的地方，我想的可能的问题就是【发酵过程】、【萃取过程】、【发酵液的放置(时间、温度等)】方面有问题，很不理解到底哪里出了有问题，求高手指点，实验进行不下去了呢……~~~~(>_<~~~~

补充：又用杯碟法对上述几个相进行重新活性检测，还没有到时间；又进行重新发酵，想着重新再试一下，这些方面也求指点，有什么建议尽量提，大神，拜托啦……
菌饼有活性，发酵液无活性，很纠结，求大神指点
菌饼平板对峙.JPG
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兰鑫
1楼 2013-07-05 16:24:37
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

wanglei512

金虫 (正式写手)
不是没活性，是活性很低，水解圈的大小不能反映酶活性的大小，况且你的菌落应该长了好几天了
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7楼2013-07-08 15:25:55
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wanglei512

金虫 (正式写手)
还有你的酶是胞外的还是胞内的，这个也很重要，如果是胞内的，在培养基中分泌的应该很少
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8楼2013-07-08 15:29:34
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普通回帖

脑袋空空

木虫 (小有名气)
拜托各位大神，金币就那么点了，全给了……
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兰鑫
2楼2013-07-05 16:26:51
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mada1986

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
放线菌吧？你不把发酵过程详细说一下，真没办法分析
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3楼2013-07-05 20:39:56
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tangmincui

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我 最近的菌是试管摇菌有活性，三角瓶活性就不好，我猜测是，菌是好氧的。不知道你得是不是，也是好氧型的。但是怎么解决问题。。。正在进行中
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4楼2013-07-06 22:13:28
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脑袋空空

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by mada1986 at 2013-07-05 20:39:56
放线菌吧？你不把发酵过程详细说一下，真没办法分析

是放线菌，我的发酵过程比较一般，就是：配置好黄豆粉培养基——分装灭菌——超净台接菌饼——封口——放摇床
别的没什么差别……求指点……
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兰鑫
5楼2013-07-08 09:41:30
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mada1986

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 脑袋空空 at 2013-07-08 09:41:30
是放线菌，我的发酵过程比较一般，就是：配置好黄豆粉培养基——分装灭菌——超净台接菌饼——封口——放摇床
别的没什么差别……求指点……...

看样子你的发酵过程只是一步发酵，这个没有活性是正常的。放线菌一般要二次发酵活性才能表现出来，应该是先用种子培养基培养种子液，再把种子液接种到发酵培养基里面。种子液的接种量在2%到5%之间，如果一次发酵的话，菌种会大量繁殖，长得很快，代谢产物产生的很少，同时也会被死亡的菌体释放的酶类分解。另外种子培养基的组成和发酵培养基不同，种子的营养比较丰富，而发酵培养基的一般比较贫乏。这样才能促进次级代谢产物的积累。
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6楼2013-07-08 12:08:20
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脑袋空空

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by mada1986 at 2013-07-08 12:08:20
看样子你的发酵过程只是一步发酵，这个没有活性是正常的。放线菌一般要二次发酵活性才能表现出来，应该是先用种子培养基培养种子液，再把种子液接种到发酵培养基里面。种子液的接种量在2%到5%之间，如果一次发酵的 ...

嗯啊，这个很有可能，我跟师姐做她的那个放线菌的时候是二次发酵~~不过，我们实验室的老师原来做这个菌的，当时也是打菌饼，发酵液也是有活性的，可是到我这就不行了……我试试二次发酵……还有别的可能不？我也再尝试下……谢谢啊，亲人啊……
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兰鑫
9楼2013-07-09 14:30:18
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脑袋空空

木虫 (小有名气)
昨天，??新活性检测的结果出???了，表示没有活性，??是??作问题……现在正在?????新???酵的活性检测……等结果……
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兰鑫
10楼2013-07-09 14:33:20
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