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脑袋空空

木虫 (小有名气)

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[求助] 菌饼有活性，发酵液无活性，很纠结，求大神指点

我现在做一种菌，前期有人做过，也分离到东西，现在出现很纠结的问题，求指点，详细如下：

1.发酵液用牛津杯法测活性，结果无活性
2.用同样的平板中的菌饼，直接做平板对峙，显示有活性，而且很高
3.这个菌原来本实验室做过，也是发酵液有活性，而且还分离到东西
4.实验将各相，乙酸乙酯相、正丁醇相、还有剩余的水相，都做了检测，没有抑菌圈……

以上三点就是我实验中矛盾的地方，我想的可能的问题就是【发酵过程】、【萃取过程】、【发酵液的放置(时间、温度等)】方面有问题，很不理解到底哪里出了有问题，求高手指点，实验进行不下去了呢……~~~~(>_<

~~~~

补充：又用杯碟法对上述几个相进行重新活性检测，还没有到时间；又进行重新发酵，想着重新再试一下，这些方面也求指点，有什么建议尽量提，大神，拜托啦……

菌饼平板对峙.JPG

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兰鑫

1楼 2013-07-05 16:24:37

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mada1986

木虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

引用回帖:

5楼: Originally posted by 脑袋空空 at 2013-07-08 09:41:30
是放线菌，我的发酵过程比较一般，就是：配置好黄豆粉培养基——分装灭菌——超净台接菌饼——封口——放摇床
别的没什么差别……求指点……...

看样子你的发酵过程只是一步发酵，这个没有活性是正常的。放线菌一般要二次发酵活性才能表现出来，应该是先用种子培养基培养种子液，再把种子液接种到发酵培养基里面。种子液的接种量在2%到5%之间，如果一次发酵的话，菌种会大量繁殖，长得很快，代谢产物产生的很少，同时也会被死亡的菌体释放的酶类分解。另外种子培养基的组成和发酵培养基不同，种子的营养比较丰富，而发酵培养基的一般比较贫乏。这样才能促进次级代谢产物的积累。