| 查看: 1251 | 回复: 4 | |||
junmove铜虫 (小有名气)
|
[求助]
毕赤酵母表达酶发酵无活性
|
|
欢迎高手解疑答惑： 本人将一个淀粉酶基因克隆到pPICZαA载体上的多克隆位点内，Sac I 线性化电转后用博莱霉素梯度（100-200ug/ml）的YPD板子筛选阳性转化子，并将几十个转化子全部拿来发酵后检测发酵液活性，在两株菌的发酵液中检测到了较高的淀粉酶活性，将这两株菌保存于甘油管中置冰箱保存。然后将保存的菌活化、发酵，相同的发酵条件，却在发酵液中再也检测不到淀粉酶的活性。做了两次转化，每次都通过转化子发酵检测活性的方法筛选到了重组酵母菌，但用保存的菌再去发酵，就检测不到活性了。哪位高手可以指点一二，为什么保菌后再发酵就无活性了？ 正常培养用的YPD, 表达培养基用的BMMY, 0.5%甲醇诱导表达。发酵用的是 50ml 离心管，发酵体积5ml。 [ Last edited by junmove on 2014-2-19 at 21:08 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有121人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 毕赤酵母培养中的发酵液挥发问题
已经有19人回复
- 拆开后的活性干酵母保存以及实验室酒精发酵的技术
已经有6人回复
- 菌饼有活性，发酵液无活性，很纠结，求大神指点
已经有11人回复
- 毕赤酵母发酵液分离
已经有5人回复
- 急！国产10L左右的生物发酵罐品牌推荐——用于毕赤酵母发酵。
已经有14人回复
- 毕赤酵母发酵问题求助
已经有5人回复
- 毕赤酵母发酵实验
已经有4人回复
- 毕赤酵母发酵的pH问题
已经有6人回复
- 毕赤酵母表达出蛋白但没有活性
已经有18人回复
- 毕赤酵母表达的蛋白无活性
已经有8人回复
- 毕赤酵母发酵上清液——脱色素？？
已经有23人回复
- 求毕赤酵母发酵用氧气罐大小
已经有6人回复
- 【求助/交流】毕赤酵母发酵消泡剂问题
已经有12人回复
- 【求助/交流】毕赤酵母发酵后期酵母变红色？
已经有8人回复
ggyy0911
铁虫 (正式写手)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 1093.6
- 散金: 16
- 红花: 8
- 帖子: 510
- 在线: 148.2小时
- 虫号: 1888956
- 注册: 2012-07-11
- 性别: MM
- 专业: 临床兽医学
2楼2015-01-23 20:39:27
junmove
铜虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1975.9
- 散金: 5
- 红花: 3
- 帖子: 130
- 在线: 291.2小时
- 虫号: 1915865
- 注册: 2012-07-29
- 专业: 生物化学
3楼2015-01-25 19:02:13
ggyy0911
铁虫 (正式写手)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 1093.6
- 散金: 16
- 红花: 8
- 帖子: 510
- 在线: 148.2小时
- 虫号: 1888956
- 注册: 2012-07-11
- 性别: MM
- 专业: 临床兽医学
4楼2015-01-26 10:24:11
junmove
铜虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1975.9
- 散金: 5
- 红花: 3
- 帖子: 130
- 在线: 291.2小时
- 虫号: 1915865
- 注册: 2012-07-29
- 专业: 生物化学
5楼2015-01-26 20:54:26
28